结核分枝杆菌对中性粒细胞功能和共刺激分子表达的影响及相关机制-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘要 结核病是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,Mtb）感染引起的以 呼吸系统感染为主的慢性感染性疾病。由于结核病导致的组织损伤主要由机体 的免疫系统介导，而且在结核病患者体内往往存在 Th1 型免疫应答受抑， Th2 型免疫应答水平异常升高的现象，结核病也被认为是一种免疫紊乱性疾病，机 体免疫应答的方向和水平在很大程度上决定着结核病的发展与转归。 中性粒细胞作为机体重要的固有免疫效应细胞，是机体抵抗病原微生物感 染的第一道防线。早期的研究认为中性粒细胞仅作为吞噬细胞在 Mtb 感染的早 期参与抗结核病的固有免疫应答，但近年来的研究显示中性粒细胞还参与了结 核病适应性免疫的诱导和调节，对结核病免疫的发展有重要影响。 共刺激分子是一类表达于免疫细胞及免疫相关细胞上的蛋白，其介导的信 号即为共刺激信号。共刺激信号对机体免疫应答的调节是双向的，通过正、负 共刺激信号的调节使机体维持免疫平衡状态。正性共刺激分子 CD28、CD80、 CD86 等能激活 T 细胞，使其增殖、分化为效应细胞，增强机体免疫应答反应， 抵抗外来入侵的病原微生物；负性共刺激分子程序性死亡因子 1（Programmed death 1，PD-1）、程序性死亡因子 1 配体（Ligand of Programmed death 1，PD-L1） 则抑制 T 细胞增殖和产生细胞因子, 抑制免疫应答反应,防止过度的免疫损伤和 自身免疫性疾病的发生,有利于维持机体的免疫自稳。近年来有研究显示中性粒 细胞表面也会有共刺激分子的表达，提示我们中性粒细胞表达共刺激分子可能 对机体抗结核病免疫有一定影响。 本研究通过对比分析活动性肺结核患者和健康人外周血中性粒细胞表面共 刺激分子的表达水平及功能的差异，探讨结核病患者外周血中性粒细胞共刺激 分子的表达特性及细胞功能的改变。并通过 Mtb 体外感染的方法验证了 Mtb 对 中性粒细胞功能和共刺激分子表达的影响。在此基础上，本研究采用特异性单 抗阻断 PD-1/PD-L1 信号途径的方法，初步探讨了该负性共刺激信号对中性粒细 胞功能的调节作用。 1本文受江西省教育厅课题基金（编号：GJJ14176）资助 II 第一部分 结核病患者外周血中性粒细胞的功能及共刺激分子的表 达特性 目的： 通过分析结核病患者中性粒细胞共刺激分子的表达水平及细胞功能的变 化，探讨结核病患者免疫功能异常与共刺激分子的关系。 方法： 收集 30 例活动性肺结核患者和 20 例健康体检者的外周血，应用流式细胞 术检测中性粒细胞表面共刺激分子的表达水平，CD62L 的表达水平以及呼吸爆 发产生 ROS 的水平；用硝酸还原酶法检测中性粒细胞产生的 NO；用 Transwell 装置检测中性粒细胞对 IL-8 的趋化能力。 结果： 与健康对照组相比，结核病患者外周血中性粒细胞具有以下特征：（1）CD86 表达显著降低（P 0.05），PD-L1 分子表达显著增加（P 0.01），而 CD28、CD80、 HLA-DR 和 PD-1 均无显著性变化（P0.05）；（2）经 PMA 刺激后，呼吸爆发产 生的 ROS 和 NO 水平显著提高（P0.05）；（3）CD62L 表达无显著性差异（P0.05）； （4）对 IL-8 的趋化能力显著降低（P 0.05）。 结论： 结核病患者中性粒细胞正性共刺激分子 CD86 表达下降，负性共刺激分子 PD-L1 表达升高，产生 ROS 和 NO 的量明显增高，趋化能力有所降低。由此提 示，共刺激分子表达失调可能会影响中性粒细胞功能。 第二部分 结核分枝杆菌感染对中性粒细胞的功能及共刺激分子表 达的影响 目的： 分析 Mtb 感染后中性粒细胞共刺激分子的表达水平及细胞功能的变化，探 讨 Mtb 感染对中性粒细胞的功能及共刺激分子表达的影响 方法： 收集 20 例健康体检者的外周血，应用流式细胞术检测感染 Mtb 后中性粒细 胞表面共刺激分子的表达水平，呼吸爆发产生 ROS 和 CD62L 的表达水平以及中 性粒细胞的凋亡率；用硝酸还原酶法检测感染 Mtb 后中性粒细胞产生的 NO；使 III 用 Transwell 装置检测感染 Mtb 后中性粒细胞对 IL-8 的趋化能力；用菌落计数 （CFU）的方法观察中性粒细胞对 Mtb 的杀菌能力。 结果： （1）与对照组相比，加入 Mtb 感染后中性粒细胞具有以下特征：①CD28、 CD80、CD86、PD-1 和 PD-L1 表达水平显著提高（P 0.01），两组中 HLA-DR 表达无显著性差异（P0.05）；②产生 ROS 和 NO 的水平显著提高（P 0.01）； ③CD62L 表达水平显著降低（P 0.01）；