金钗石斛的ARMS鉴别及其SSR分子标记的开发-植物学专业论文.docxVIP

学位论文独创性声明本人郑重声明： 学位论文独创性声明 本人郑重声明： 1、坚持以搿求实、创新一的科学精神从事研究工作． 2、本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究 成果。 3、本论文中除引文外。所有实验、数据和有关材料均是真实的。 4、本论文中除引文和致谢的内容外，不包含其他人或其它机构 已经发表或撰写过的研究成果。 5、其他同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了声明并表示 了谢意。 作者签名： 逗敦 日 期：2鲤＆：蔓：塑 学位论文使用授权声明 本人完全了解南京师范大学有关保留、使用学位论文的规定，学 校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电 子版和纸质版；有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论 文进入学校图书馆被查阅；有权将学位论文的内容编入有关数据库进 行检索；有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在 解密后适用本规定。 作者签名： 造独． 日 期： 塑星：≤!塑 中文摘要金钗石斛的ARMS鉴别及其 中文摘要 金钗石斛的ARMS鉴别及其 SSR分子标记的开发 摘 要 金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl．)为兰科(Orchidaceae)石斛属 (Dendrobium Sw．)多年生附生草本植物，集观赏和药用价值于一身。由于人为 过度采收及自然繁殖率低，导致金钗石斛野生种质资源遭受严重破坏，我国已将 其列为珍稀濒危药用植物。本文对金钗石斛进行了ARMS鉴别及其微卫星标记 的开发研究，有利于其种质资源的保存和遗传多样性的保护。 本文根据金钗石斛及其它lO种石斛的rDNA ITS序列，设计出鉴别金钗石 斛的两对ARMS引物，运用ARMS技术鉴别金钗石斛，并对这两对鉴别引物的 效果作了比较。PCR扩增结果表明，在退火温度为“℃-65℃时，突变3’端第三 个碱基的引物在此温度范围内均可鉴别金钗石斛，扩增出长度约260bp的目的条 带；而突变3’端第四个碱基的引物在68℃时才可鉴别金钗石斛。可见，前一对 引物的鉴别温度范围更宽一些。因此，运用ARMS技术可以快速、有效地从石 斛属植物中鉴别出金钗石斛，而且，其结果的稳定性、可靠性较好。 运用磁珠富集法开发金钗石斛的SSR分子标记。首先，构建小片段的基因 组文库，用生物素标记的混合探针(AC)蜘(AG)15与基因组文库DNA选择 性杂交，利用链霉亲和素包裹的磁珠富集含有微卫星DNA的片段，再进行克隆、 测序。共分离了30条微卫星序列，其中，．核心序列重复次数达lO次以上的有 26条，占总数的86．67％，并根据这些序列的特征进行分类；除了一些序列因自 身结构原因，侧翼序列较短而不能设计引物外，设计了16对引物，通过PCR反 应条件的优化，筛选出9对引物，扩增结果显示出多态性，可作为微卫星标记， 进一步用于金钗石斛居群分子生态学的研究。 关键词：金钗石斛；ARMS；SSR分子标记；磁珠富集 英文摘要The 英文摘要 The authentication of Dendrobium nobile with ARMS and the isolati,isolation ofoI microsatellite mark(kers in them Abstract As a famous herb，Dendrobium nobile Lindl．(Orchidaceae)has both ornamental and pharmaceutical values．But the species is in severe danger because of human exploitation and low reproductive rate．To conserve the resource and genetic diversity of D．nobile，this research includes the authentication of DI nobile with删S and the isolation of microsatellite markers in them． The amplification refractory mutation system(ARMS)was applied to authenticate D．nobile．Based on rDNA ITS sequences database of D，nobile and 10 other Dendrobium species，two pairs of ARMS primers were designed by mismatching the t【llird or fourth base of the traditional alle