表面活性剂对大肠杆菌胞外生产α环糊精葡萄糖基转移酶的-生物通.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（７）：５６～６１ 表面活性剂对大肠杆菌胞外生产 环糊精葡萄糖基转移酶的影响 α? １，２ １，２ １ １ １，２ １，２ 丁闰蓉 　李兆丰 　李金根 　陆辰霞 　吴　敬 　陈　坚 （１江南大学食品科学与技术国家重点实验室　无锡　２１４１２２） （２江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室　无锡　２１４１２２） 摘要　研究了不同浓度表面活性剂Ｔｗｅｅｎ８０，ＴｒｉｔｏｎＸ１００，ＳＤＳ对大肠杆菌生产 环糊精葡萄糖 ? ? α? 基转移酶（ ＣＧＴ酶）的影响。结果表明：发酵初始添加Ｔｗｅｅｎ８０和ＴｒｉｔｏｎＸ１００的最适浓度分 α? ? ? 别为２％，０．５％，最终胞外酶活分别达２．０３Ｕ／ｍｌ和４．９２Ｕ／ｍｌ，相对于未添加表面活性剂时提高 ４．６倍和１２．６７倍，且改变添加时间不能提高酶的产量；发酵３６ｈ添加０．０２％ＳＤＳ对 ＣＧＴ酶产 α? 量促进最大，最终胞外酶活达５．３１Ｕ／ｍｌ，较对照组提高１２．７５倍。表面活性剂对 ＣＧＴ酶生产 α? 的促进作用可能是由大肠杆菌细胞内外膜渗透性增加所致，使细胞周质空间中 ＣＧＴ酶能更加 α? 快速地渗透到胞外。 关键词　Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓｍａｃｅｒａｎｓ　环糊精葡萄糖基转移酶　表面活性剂　细胞膜渗透性 中图分类号　ＴＱ９２５＋．１１ 　　环糊精葡萄糖基转移酶（ＣＧＴ酶，ＥＣ２．４．１．１９）是 本实验室已成功构建了含有周质分泌型信号肽ＰｅｌＢ的 糖基水解酶 淀粉酶家族（家族１３）的重要成员，其独 表达载体ｐＥＴ２０ｂ（＋）／ｃｇｔ并转化Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）宿 α? ［１，２］ 主菌。在工程菌的培养过程中我们发现分泌到周质的α 特功能是能将淀粉转化为环糊精（ＣＤ） 。ＣＤｓ有 ， α ＣＧＴ酶渗漏到培养基中，实现了来源于软化类芽孢杆菌 和 三种主要的类型，它们分别由６，７，８个葡萄糖通 ? β γ （Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓｍａｃｅｒａｎｓ）ＪＦＢ０５０１的 ＣＧＴ酶的胞外成 过 １，４糖苷键连接而成。环糊精具有内疏水外亲水 ? α? α? 的筒形结构，能与许多疏水化合物或功能基团形成包 功表达。这种非特异性的周质蛋白渗漏现象在其他一些 ［３］ ［１１］ 合物 ，从而改变其物理化学性质。这种独特的性质 重组蛋白分泌表达中有类似报导 。但在前期工作中， 使环糊精在食品、医药、农业、化妆品、化学、环保等领 我们发现重组蛋白在发酵过程中会积累于周质空间，培 ［４～６］ 养基中酶的产生有滞后期，发酵周期较长。 域有广泛应用