谷氨酸棒杆菌L-天冬氨酸α-脱羧酶在大肠杆菌中的表达及-微生物学报.PDF

微生物学通报 Dec. 20, 2013, 40(12): 21612170 Microbiology China © 2013 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 谷氨酸棒杆菌 L-天冬氨酸 α-脱羧酶在大肠杆菌中 的表达及酶转化生产 β-丙氨酸 1,2 1,2 1,2* 赵连真 张梁 石贵阳 (1. 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室 江苏 无锡 214122) (2. 江南大学 生物工程学院 江苏 无锡 214122) 摘 要: 【目的】克隆谷氨酸棒杆菌来源L-天冬氨酸 α-脱羧酶基因, 实现其在大肠杆菌 中的异源表达, 并进行酶转化L-天冬氨酸合成β- 丙氨酸的研究。【方法】PCR 扩增谷氨酸 棒杆菌 L-天冬氨酸 α-脱羧酶基因pand , 构建表达载体 pET24a(+)-Pand, 转化宿主菌大肠 杆菌BL21(DE3), 对重组菌进行诱导表达, 表达产物经DEAE 离子交换层析和G-75 分子 筛层析纯化后进行酶学性质研究, 然后进行酶转化实验, 说明底物和产物对酶转化的影 响。【结果】重组菌SDS分析表明Pand 表达量可达菌体总蛋白的50%以上, AccQ·Tag 法检测酶活达到94.16 U/mL 。该重组酶最适反应温度为55 °C, 在低于37 °C 时保持较好 的稳定性, 最适pH 为6.0, 在pH 4.0−7.0 范围内有较好的稳定性。酶转化实验说明: 底物 L-天冬氨酸和产物 β- 丙氨酸对转化反应均有抑制作用; 实验建立了较优的酶转化反应方 式, 在加酶量为每克天冬氨酸 3 000 U 时, 以分批加入固体底物 L-天冬氨酸的形式, 使 100 g/L 底物转化率达到 97.8%。【结论】重组L-天冬氨酸α-脱羧酶在大肠杆菌中获得高 效表达, 研究了酶转化生产 β- 丙氨酸的影响因素, 为其工业应用奠定了基础。 关键词: L-天冬氨酸α-脱羧酶, β- 丙氨酸, 谷氨酸棒杆菌, 表达, 纯化, 转化率 基金项目：国家 863 计划项目(No. 2012AA021201, 2011AA100905); 教育部新世纪优秀人才支持计划项目 (No. NCET-11-0665) *通讯作者：Tel: 86-510 : gyshi@ 收稿日期：2012-12-26; 接受日期：2013-03-15 2162 微生物学通报 Microbiol. China 2013, Vol.40, No.12 Expression of L-aspartate α-decarboxylase from Corynebacterium glutamicum in Escherichia coli and its application in enzymatic synthesis of β-alanine ZHAO Lian-Zhen1,2 ZHANG Liang 1,2 SHI Gui-Yang 1,2* (1. National Engineering Laboratory for