金龟子绿僵菌孢子制备、贮存及检测标准化研究-农业昆虫与害虫防治专业论文.docxVIP

摘 摘 要 金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae Somkin)是一种昆虫病原菌，在农林害虫生物防治中 广泛应用，国内外己有50多种商品制剂注册登记，然而日前国际及国内尚无统一的生产及质量 标准，影响和制约真菌制剂的开发和应用。本研究以金龟子绿僵菌IMl330189为目标菌株，研究 其孢子制备、贮存及其检测方法标准化，为我国真菌杀虫剂标准化提供参考。主要研究结果如F： (1)盒龟子绿僵菌孢子制备标准化研究 通过检测菌种的孢子生K性状，4℃、．15 aC、．85℃下贮存3个月菌种均需4h打破休眠，12h 后生长基本稳定。点接法和平板法培养金龟子绿僵菌表明，SDAY培养基为最适培养基，其主要 指标产孢量分别为5．30)10Ssp／cm2、2．38x108sp／cm2，显著高于其它培养基．且培养性状稳定。继 代培养研究发现，从第7代开始出现产孢量显著F降、菌丝徒长等退化特征，因此确定生产菌种 继代培养6代后必须进行复壮。4C下贮存不同时间菌种生物测定结果表明，30周屙东亚b蝗死 亡率下降至87％，冈此需对菌株进行移植或复壮处理。 (2)金龟子绿僵菌孢子贮存标准化研究 孢子萌发率检测以涂平板法效果优丁-喉头喷雾法，且在SDAY标准培养基上培养20。22h萌 发率为99．79—99．81％，检测效果最佳。将不同梯度含水量(23．67％、8_57％、6．54％、3．67％)孢 子粉以离心管石蜡封装和安培管火焰熔封斤在不同温度(室温、4“C、一15C、一85℃)下贮存，安 培管火焰熔封处理优于离心管石蜡封装处理，孢子活率总体随含水量的增加及贮存时间的延K而 旱下降趋势，且各处理间PO．01，差异极显著。根据对数残留定律y--a·e“拟合估计孢子失活50％ 所需时间(1k)和失活90％所需的时间(1k)，结果表明：含水量为23．67％的孢子粉在室温下 贮存130d全部失活；含水量为8．57％的孢子粉在室温F贮存1k和1k值分别为78．68d及259．51d； 含水量为6．54％的孢子粉在室温下贮存1．卯和Tgo值分别为106．09d和349．95d；含水量为3．69％ 的孢子粉对温度耐性最高，在室温下町贮存时间大于18个月，适合贮存短期内使用的孢子粉，一15 ℃和-85℃下T90值分别为3290．55d和5753．96d，适合贮存需要K期贮存的孢子粉。闪此，贮存金 龟子绿僵菌孢于粉时，建议采用安培管火焰熔封，并将其含水量降低到5％。 (3)金龟于绿僵菌对东亚飞蝗生物测定标准化研究 以东砸飞蝗为供试虫进行金龟子绿僵菌室内生物测定，通过龄期选择性试验及不同接种方 法、接种浓度、接种量、温度、湿度和光照强度试验，结果表明生物测定标准应为：以3龄蝗蝻 为供试虫，接种部位是前胸背板F方，接种方法为油剂点接，接种浓度为1×107～1×10Ssp／ml， 接种剂量为0．1～0．2叫虫，生测温度T三23～27℃，相对湿度RH=45—75％，光照强度L=2050Lux。 (4)金龟子绿僵菌胞外蛋白酶与毒力相关性研究 在菌株生长温度范围内，随着温度升高，蛋白酶产量增加，而相应的u’50值减小，说明胞外 蛋白酶生产水平与毒力之间存在一定的协同性，其回归方程为Y=0．0727x+2．1015，R2=0．8918， 可作为一个参考指标对菌种进行初步筛选，但不能完全代替毒力测定而成为菌种质量性状的检测 指标。 关键词：金龟子绿僵菌制备贮存检测标准化 AbstractMetarhizium Abstract Metarhizium anisopliae Sorokin entomoganous fun#which been applied widely in biological control of the agriculture and forestry pests．There have been more than 50 myco-insecticides registered home and abroad．However，the problems as standard sample，the standardization the strain and bioassay etc．，have been resolved successfully，affecting and restricting deeper exploitation and application．In this research，the standardization preparation，storage and inspection of M anisopliae conidia been studied regarding M anisopliae IMl33