课件：甲苯达唑.ppt

分光光度法 Baeyens等利用MBZ和FLU在碱性条件下与0.3%过氧化氢反应产生荧光,检测了制剂中药物含量,这一方法也可用于四咪唑、右旋咪唑和左旋咪唑的检测。 4、免疫分析法 免疫分析法是一种简便、灵敏、选择性高的检测方法。 一般情况下,生物样品如血浆、血清、牛奶能够直接测定或者稀释后测定。 早期,放射免疫法被应用于测定动物组织和农作物中的苯并咪唑类残留。 Nerenberg等建立了放射免疫法检测血浆中的OFZ,多克隆抗体通过兔免疫接种OFZ和多聚赖氨酸载体培养得到,后来这种方法应用于绵羊脂肪组织中OFZ残留的检测。 Newsome等采用多克隆抗体、放射免疫法检测农作物中BEN及其主要代谢产物MBC,多克隆抗体通过兔接种半抗原-2-氨基苯并咪唑和人血清蛋白培养得到。 5、气相色谱法 只有少数苯并咪唑类药物(如:TBZ、5-OH-TBZ)可直接用GC法分析。 Lafuente等采用硅酮键合相的毛细管柱(10m× 0.53mm)分离水果中TBZ残留物,分别用氮磷检测器(NPD)和电子捕获检测器(ECD)检测,发现NPD检测的灵敏度更高,LOD为10μg/kg。 Oishi等采用GC-NPD法检测TBZ,石英毛细管柱(25m× 0.2mm)分离,LOD为10μg/kg。 大部分苯并咪唑类药物极性较高,难以气化,热稳定性差,故GC法分析需要衍生化。 衍生化 由于苯并咪唑类分子结构上含氨基和羟基,可与衍生剂发生酰化、硅烷化和烷基化反应。 常用的酰化衍生剂有三氟乙酸酐(TFA)、七氟丁酸酐(HFB)和五氟苄基酰氯(PFB-CO-Cl); 硅烷化试剂有N,O-双三甲硅基乙酰胺(BSA)、N-甲基-N-(叔丁基二甲基硅烷基)三氟乙酰胺(MTBSTFA)和N-甲基-(三氟乙酰胺) (MBTFA); 烷基化衍生剂有碘甲烷、溴代五氟苯、五氟苄基溴(PFB-Br)、二甲基乙缩醛-二甲基甲酰胺(DMA-DMF)和氢氧化三甲基苯胺(TMAH)。 6、液相色谱法 HPLC法被广泛应用于动物组织中苯并咪唑类残留的分析,通常采用反相柱如C18、C8柱分离,也有采用正相柱如uBondapak NH2柱分离。 存在问题： 采用硅胶基质的RP-HPLC法测定苯并咪唑类时,硅胶键合相表面残余的带负电荷硅醇基能强烈吸附苯并咪唑类药物,导致保留时间过长、峰拖尾或变形。 当流动相在弱酸性或中性时(pH5~7),苯并咪唑类的离子化被抑制,最后出峰的组分保留时间较长,峰展宽严重;当流动相为酸性时(pH2~3),苯并咪唑类的离子化增强,先出峰的组分容易分离,但后出峰的组分拖尾严重。 解决办法： 为降低游离硅醇基的吸附作用和增加苯并咪唑类药物在流动相中的溶解性,可采取离子抑制或离子增强的方法来解决。 通过调节流动相的pH值、加入离子对试剂、掩蔽剂、盐和较高比例的有机改性剂等,对流动相进行优化。 例如,在酸性流动相中加入四丁基铵阳离子,可改善苯并咪唑类的色谱性能,消除峰变形,提高分辨率。 早期,分离柱有采用硅胶柱或阳离子交换柱。 Karlaganis等用硅胶柱分离血浆中的BNZ,以乙腈-氯仿饱和水溶液-甲酸(75+92.5+0.25)作流动相。 Alvinerie等用硅胶柱分离TCB、TCB-SO、 TCB-SO2和OFZ,在15min内获得良好的分离。 Kirkland等用阳离子交换柱分离植物和土壤中的BEN残留。 Arenas等用强阳离子交换柱分离牛奶中的TBZ和5-OH-TBZ。 Bogan等最早采用C18柱分离8种苯并咪唑类残留,分析时间14min,但分离度较差。 Long等和Wilson等分别建立了多残留RP-HPLC法分离8种苯并咪唑类药物,分析时间为35min,采用梯度洗脱,可改善分离度。 Rose用C8柱、二元泵梯度洗脱,35min内分离OFZ和9种代谢产物。 Roudaut等用C18柱,二元泵梯度洗脱,分离了10种苯并咪唑类残留,除OXI和OFZ外,所有残留物在16min内获得分离。 检测器 苯并咪唑类及其代谢物在245nm和295nm处有强的吸收,可用紫外检测。在295nm处摩尔吸收系数相对较低(10000),但干扰少,吸收峰稳定、灵敏度足够,应用较多。 对于本身有荧光的化合物,如阿苯达唑及其代谢物和噻苯达唑及其代谢物,可用荧光检测,内源性杂质干扰小、检测灵敏度高。 光电二极管阵列检测(PDA)可提供化合物的吸收光谱图(200~700nm),与标准品谱图进行对照,可对样品作出初步的定性判断。 国家标准 农业部1730号公告-1-2012 饲料中8种苯并咪唑类药物的测定 液相色谱-串联质谱法和液相色谱法 本标准规定了饲料中8种苯并咪唑类药物（噻苯达唑、阿苯达唑、芬苯达唑、奥芬达唑、氟苯哒唑、甲苯咪唑、氧苯达唑和三氯苯达唑）含量的液相色谱-串联质谱测定方法和液相色