HPLC 法检测蛇足石杉内生真菌胶胞炭疽发酵液中石.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 胡莉琴 等/HPLC 法检测蛇足石杉内生真菌胶胞炭疽发酵液中石杉碱甲和石杉碱乙的含量 777 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn May 25, 2018, 34(5): 777−784 DOI: 10.13345/j.cjb.170387 ©2018 Chin J Biotech, All rights reserved ·生物技术与方法 · HPLC 法检测蛇足石杉内生真菌胶胞炭疽发酵液中石 杉碱甲和石杉碱乙的含量 1,2 1,2 1,2 1,2 2,3 1,2,3,4 胡莉琴 ，康信聪 ，沈鹏原 ，陈田 ，张家银 ，刘东波 1 湖南农业大学 园艺园林学院，湖南 长沙 410128 2 国家中医药管理局亚健康干预技术实验室，湖南 长沙 410128 3 湖南省作物种质创新与资源利用重点实验室，湖南 长沙 410128 4 湖南省植物功能成分利用协同创新中心，湖南 长沙 410128 胡莉琴, 康信聪, 沈鹏原, 等. HPLC 法检测蛇足石杉内生真菌胶胞炭疽发酵液中石杉碱甲和石杉碱乙的含量. 生物工程 学报, 2018, 34(5): 777–784. Hu LQ, Kang XC, Shen PY, et al. Detection of Huperzine A and Huperzine B in fermentation broth of endophytic fungus Colletotrichum gloesporioides from Huperzia serrate by HPLC . Chin J Biotech, 2018, 34(5): 777–784. 摘 要: 建立了高效液相色谱 (HPLC) 测定蛇足石杉 (Huperzia ser rate) 内生真菌胶胞炭疽发酵液中石杉碱甲 (Huperzina A) 和石杉碱乙 (Huperzine B) 含量的方法，并以此方法检测胶胞炭疽发酵液中石杉碱甲和石杉碱乙含 量的积累。内生真菌发酵液经氯仿萃取、甲醇溶解、过滤后进行高效液相检测分析，选用Agilent Eclipse plus-C18 色谱柱 (250 mm×4.6 mm, 5 μm) ，以0.015 mol/L 乙酸铵 (pH 6.8) 和甲醇溶液 (70 ∶30) 为流动相进行等度洗脱， 流速 1 mL/min，检测波长为308 nm，连续检测内生真菌胶胞炭疽发酵液中第6– 15 天石杉碱甲和石杉碱乙的含量 积累。结果表明，发酵提取液中的石杉碱甲和石杉碱乙可在 25 min 内进行很好的分离和分析，石杉碱甲在 1.50−48.00 μg/mL 范围内线性关系良好 (相关系数r 为0.999 5) ，石杉碱乙在0.25−7.50 μg/mL 范围内线性关系良 好 (相关系数r 为0.999 7)，石杉碱甲和石杉碱乙的平均加标回收率分别为106.83%、108.06%，相对标准偏差 (RSD) 分别为 3.34% 、3.60% 。该方法简便、快速、精密度高、结果准确，适用于内生真菌发酵液中石杉碱甲和石杉碱 乙含量检测。在发酵过程中，内生真菌发酵液中石杉碱甲和石杉碱乙的含量呈现先增后减，随后有所增加继而又 减少的趋势。石杉碱甲和石杉碱乙的含量分别在内生真菌发酵第 14 天、第8 天达到最高，分别为 12.417 0 μg/mL、 4.660 3 μg/mL 。该方法学的建立为内生真菌胶胞炭疽合成石杉碱甲与石杉碱乙的机制研究提供了检测手段，从而 有利于药物新资源的开发。 关键词: 高效液相色谱，次生代谢产物，千层塔，内生真菌，石杉碱甲，石杉碱乙 Received: October 2, 2017; Accepted: November 21, 2017 Supporte