酒精对心肌组织影响的实验研究-人体解剖与组织胚胎学专业论文.docxVIP

中文摘要酒精对心肌组织影响的实验研究 中文摘要 酒精对心肌组织影响的实验研究 硕士研究生：姜敏 硕士生导师：于向民 摘要 目的：通过给小鼠腹腔注射不同浓度乙醇，建立一个早期的大量饮酒的动物模 型，运用电镜和光镜技术观察心肌细胞的形态学及超微结构的变化，用酶细胞化学 染色方法观察心肌细胞细胞色素C氧化酶的活性变化，采用免疫组织化学方法观察 酒精对细胞凋亡及凋亡相关基因BCL．2和BAX表达的影响．研究酒精对一11,脏毒性 作用的机理。 方法：将60只健康雄性昆明种小白鼠随机分为4组：酒精I、II、III组和对照 组，分别给予10％、20％、30％浓度酒精和生理盐水腹腔注射，每日一次，连续处 理30天后取材。部分标本制成石蜡切片，经HE染色，光镜下观察酒精对心肌细胞 形态学影响；经核固红．结晶紫染色对心肌细胞凋亡情况进行定量分析；用免疫组织 化学的方法显示酒精对心肌细胞凋亡相关基因BCL．2和BAX的表达情况，并利用 图像分析技术进行定量分析。部分标本制备透射电镜标本，电镜下观察酒精对心肌 细胞超微结构的影响。其余标本置于恒冷箱切片机内，分别切151am及401．tm厚冰 冻切片，细胞色素c氧化酶染色，光镜下观察酶活性变化，并利用图像分析技术进 行定量分析；401．tm厚冰冻切片，孵育后制作电镜标本，透射电镜下观察心肌细胞 线粒体上细胞色素C氧化酶的活性变化。 结果：l、形态学观察显示：酒精注射后各组心肌细胞HE染色未见明显异常。 透射电镜下，实验各组肌原纤维排列紊乱，出现空泡，肌丝溶解，线粒体肿胀，大 小不一，嵴断裂甚至融合消失，细胞核形状不规则，核膜厚薄不均，部分染色质凝 聚、边集，于核膜下呈斑块状，且随着酒精浓度增加，超微结构的改变越明显。2、 核固红一结晶紫染色观察及固缩细胞核计数结果显示：实验组细胞核有的被染成蓝紫 色，染色质凝聚成块状，有的细胞核固缩。高倍镜下计数显示实验各组异常的细胞 核明显多于对照组(P0．叭)，且随着酒精浓度增加．固缩核细胞数逐渐增加。3、 免疫组织化学染色观察与图象分析结果显示：实验各组中BCL．2表达比对照组明显 减弱(P0．01)，着色浅，且分布不均；相反，实验各组BAX表达比对照组明显增 强(P0．01)，染色加深，可见粗大颗粒。4、细胞色素C氧化酶染色观察：实验各 组与对照组比较心肌细胞酶活性减弱，颗粒染色深浅不一，分布不均(P0．01)，月． 中文摘要与酒精浓度呈正相关。电镜下，细胞色素C氧化酶定位于线粒体内膜和嵴上，实验 中文摘要 与酒精浓度呈正相关。电镜下，细胞色素C氧化酶定位于线粒体内膜和嵴上，实验 各组可见线粒体嵴电子密度降低，酶活性减弱。 结论：l、心肌组织结构的改变与酒精的摄入量成正相关，摄入量较少时，光 镜和电镜观察均未出现明显的心肌细胞的异常变化，但随着摄入量的增大，心肌细 胞的超微结构即发生异常改变，且随着浓度的增加，异常更加显著。当饮酒继续． 结构上的损伤会进一步加剧。结构的改变与心肌功能异常密切相关，当各种结构损 伤达到一定程度时必然会出现心肌功能的改变。2、心肌细胞凋亡在酒精对心肌影 响的发生机制上发挥一定的作用，随着酒精浓度的增加，心肌细胞的凋亡征象愈加 明显，固缩核细胞数逐渐增加，我们推测酒精可能引起心肌细胞凋亡。3、长期大 量饮酒能减弱线粒体的功能，改变其结构；而当心肌细胞发生凋亡时，线粒体结构 和功能也可发生改变，可以推断出线粒体也参与了酒精引起心肌细胞凋亡的过程。 4、酒精引起的心肌细胞凋亡与凋亡相关基因Bcl一2和Bax的异常表达有关，二者 在细胞凋亡中是相互拮抗的关系，酒精使心肌细胞Bcl一2的表达减弱，而Bax的表 达增强。5、酒精可以减弱线粒体上Cox的活性，使线粒体功能发生改变，致心肌 有氧代谢低下，最终将导致心肌细胞结构和功能的改变。 关键词：酒精：心肌细胞：形态结构：凋亡；小鼠 英文摘要The 英文摘要 The Experimental Study of the Effect of Alcohol on Cardiac Muscle Abstract Objectives：We established arl animal experimental model ofexcessive drinking of alcohol in early stage by giving different concentration of alcohol to healthy mice．The morphological changes were observed by light and electron microscopy．The changes of enzyme activity of cytoehrom C oxidase(Cox)in m