对叠氮L苯丙氨酸盐酸盐的合成及其在重组人内皮抑素中的定点引入.PDF

学 报 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１２，４３（５）：４７１－４７４ ４７１ 对叠氮Ｌ苯丙氨酸盐酸盐的合成及其 在重组人内皮抑素中的定点引入 １ ２ １ １ １ 郭林峰 ，徐云根 ，田　縥 ，刘静娴 ，姚文兵 １ ２ （中国药科大学 生命科学与技术学院；药物化学教研室，南京２１０００９） 摘　要　以对硝基Ｌ苯丙氨酸为原料，通过５步反应制备纯度较高的对叠氮Ｌ苯丙氨酸盐酸盐。利用构建好的重组 表达载体和正交氨酰ｔＲＮＡ合成酶／ｔＲＮＡ（ＭｊＴｙｒＲＳ／ｔＲＮＡ）系统将对叠氮Ｌ苯丙氨酸（ｐＡｚＰｈｅ）定点（３１位）引入到人内皮 抑素分子中，表达人内皮抑素中突变体———ｒｈＥｓ３１ｍ。对分离纯化所获得的目的产物进行 ＳＤＳＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分 析鉴定，突变体ｒｈＥｓ３１ｍ电泳纯度达９０％以上，同时可被抗人内皮抑素抗体特异性识别。通过 ＭＴＴ法检测ｒｈＥｓ３１ｍ体外 抗人脐静脉内皮细胞增殖活性，结果显示：与野生型ｒｈＥｓ相比，ｒｈＥｓ３１ｍ保留了大部分生物活性。本实验表明单个ｐＡｚＰｈｅ 的定点引入并未破坏重组人内皮抑素的空间结构和生物活性。 关键词　对叠氮苯丙氨酸；合成；人内皮抑素突变体；重组表达 中图分类号　Ｑ７８６　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１２）０５－０４７１－０４ ＳｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｓｉｔｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎｏｆｐａｚｉｄｏＬｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅｈｙｄｒｏ ｃｈｌｏｒａｄｅｉｎｔｏｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ １ ２ １ １ １ ＧＵＯＬｉｎｆｅｎｇ牞ＸＵＹｕｎｇｅｎ牞ＴＩＡＮＨｏｎｇ牞ＬＩＵＪｉｎｇｘｉａｎ牞ＹＡＯＷｅｎｂｉｎｇ ２ ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ牞ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　ｐＡｚｉｄｏＬｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ牗ｐＡｚＰｈｅ牘ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒａｄｅｗｉｔｈｈｉｇｈｐｕｒｉｔｙｗａｓｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｆｉｖｅｓｔｅｐｓｕｓｉｎｇｐ ｎｉｔｒｏＬｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅａｓｔｈｅｓｔａｒｔｉｎｇｍａｔｅｒｉａｌＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｔｏｅｘｐｒｅｓｓｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎｍｕｔａｎｔｒｈＥｓ３１ｍＴｈｅｎｐＡｚＰｈｅｗａｓｓｉｔｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ牗ｓｉｔｅ３１牘ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄｉｎｔｏｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ牗ｒｈＥｓ牘ｂｙａｐｐｌｙｉｎｇｔｈｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄｏｒｔｈｏｇｏｎａｌａｍｉｎｏａｃｙｌｔＲＮＡｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ／ｔＲＮＡｐａｉｒＴｈｅｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｆｔｅｒｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙＳＤＳＰＡＧＥａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇＴｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆｔｈｅｍｕｔａｎｔｉｓｂｅｙｏｎｄ９０％牞 ａｎｄｃａｎｂｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄｂｙａｎｔｉｂｏｄｙｏｆｈｕｍａｎｅｎｄｏｓｔａｔｉｎＴｈｅＨＵＶＥＣ牗ｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅ ｌｉａｌｃｅｌｌ牘ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏｂｙｒｈＥｓ３１ｍｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙＭＴＴ牞ａｎｄｒｅｓｕｌｔｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｒｈＥｓ３１ｍｒｅｔａｉｎｅｄｍｏｓｔ ｏｆｔｈｅｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｗｉｌｄｔｙｐｅｒｈＥｓＴｈｅｓｔｕｄｙｉｎｄｉｃａｔｅｓｔｈａｔｓｉｔｅｓｐｅ