X-射线致人淋巴细胞基因组差异表达及剂量-效应关系研究.pdfVIP

x．射线致人淋巴细胞基因组差异表达及剂量．效应关系研究 第一部分 优势，再配合使用生物信息学中数据挖掘的方法，可以为研究者提供新的启示和 假说。基因芯片技术能够同时检测上万个基因的表达情况，甚至实现全基因组定 位筛查。这就使从上万个人类基因中筛选出辐射反应基因成为可能，并研究这些 基因表达改变与辐照剂量间的关系。 X．射线照射的人外周 本研究利用基因表达谱芯片，对经O．5Gy、2．OGy和5．0Gy 血淋巴细胞的基因表达谱进行测定，筛选出低、中、高剂量照射的辐射反应基因， 为利用基因表达改变估算电离辐射生物剂量和探究辐射的分子作用机制提供实验 依据。 1．材料与方法 1．1．实验材料 1．1．1．主要仪器 class 二氧化碳培养箱：HEPA 100(美国) Eppendorfbiophotometer(德国) Bio Rad凝胶成像系统(美国) BiometraTGRADIENT Biometra) PCR仪(德国Whatman Agilent杂交炉：G2545A Agilent扫描仪：G2655AA 2100 AgilentBioanalyzer-G2938B KD一2直线加速器(德国西门子) 水平电泳仪(北京六一仪器厂) V 酶标仪：GeneSpec 1．1．2．主要试剂 NTP(PerkinElmer，NEL580) Cy5 NTP(PerkinElmer，NEL581) Cy3 无RNA酶水(实验室配制) 20×SSPE(Invitrogen，15591—043) Solution(SIGMA，L7414) 20％N—Lauroylsarcosine LowRNALinear and kit 184—3523) Input Labeling Am．)lication plus(Agilent，5 Insitu kit 184-3568) Hybridization plus(Agilen，5 Stabilizationand 185—5979) Solution(Agilent，5 Drying 2 x。射线致人淋巴细胞基因组差异表达及剂量．效应关系研究——第二_部分 Gasket slide(Agilent，G2534—60003) HybridizationChamber(Agilent，2534A) X 人4 44K全基因组表达谱芯片(Agilent) RPMI 1640(含25mMheps，含L厂谷氨酸盐)(Gibc01) 小牛血清(杭州四季青生物工程公司) 淋巴细胞分离液(上海华精) RNA提取试剂盒(TRIzoIReagen，Invitrogen) 焦磷酸二乙酯(DEPC，Sigma) II reverse 反转录酶(Superscript RNA酶抑制剂(Ribonucleaseinhibitor，200U／pl，TaKaRa) Agrose(Biow