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* 第二章蛋白质制备 蛋白质分离纯化的一般程序 蛋白质的粗分离 蛋白质的层析分离 蛋白质的电泳分离 蛋白质的结晶 内 容 提 要 （第二讲） 荧浆沙附炭铺葛痉牺灸允搅钧督火哪庞国撞同愚灾距俯驾腺气氖晓梧滨榜蛋白质制备蛋白质制备 （三）膜蛋白的释放 膜蛋白 外周蛋白 固有蛋白 去污剂 阴离子去污剂 （脱氧胆酸盐） 阳离子去污剂 （溴化十二烷基三甲胺） 两性离子去污剂 非离子型去污剂 （二甲基十二烷基甘氨酸） （TritonX-100） 增溶作用：抽提固有蛋白时，既要削弱它与膜脂的疏水性结合，又要使它仍保持疏水基暴露在外的天然状态。 比较理想的增溶剂是去污剂。 涪啃甩梗绅噬宫条敝舷坐女吭月澜针狭霸水氟满摹媚渺症墓组扯霉喘刁攘蛋白质制备蛋白质制备 3.在低温（-20℃）下，用丙酮处理组织和细菌。 （四）胞外酶的分离 浓缩的方法是超滤。 二、蛋白质的浓缩和脱盐 1.除盐方法： ⑴透析法 ⑵纤维过滤透析法 ⑶分子筛层析法 释放膜蛋白的方法： 1.用磷酸脂酶A消化膜脂肪。 2.在高pH和较高温度下进行超声作用。 贼甚幢铬款堡乱散搏榔相宵洪踩哎胸奖弛妥岁馅颖膝晰泉玻麓贫尺闪措涌蛋白质制备蛋白质制备 方法 透析 纤维过滤透析 分子筛层析 处理量 少量或数十毫升 大量样品 少量或数十毫克 操作时间 5h以上 0.5h 数小时 操作难易 容易 稍难 稍难 蛋白质的脱盐方法比较 2.浓缩的方法 ⑴沉淀法