CLC-3基因在宫颈癌中的表达及临床意义.pdfVIP

·论文· CLC-3基因在宫颈癌中的表达及临床意义 刖 舌 宫颈癌是发展中国家妇女最常见的恶性肿瘤，其发病率占女性生殖器官恶性 肿瘤的首位，是危害妇女健康及生命的重要因素，大量研究证实宫颈癌与人乳头 状瘤病毒(HPV)感染有关，然而并非感染HPV就注定发展为宫颈癌，提示有其他 因素共同参与宫颈癌的恶性转化过程。氯离子通道是细胞的主要阴离子通道，在 细胞膜电位，调节细胞跨上皮转运，维持胞内pH值及在细胞容积调节等方面氯通 道都发挥重要的作用n1，CLC一3属电压门控性氯离子通道，但其又有容积调控氯通 道的部分特性，近年的研究发现：CLC-3在细胞周期的调控，细胞凋亡，细胞黏 附，细胞动力学方面都有一定的作用乜。43，在人宫颈癌细胞系中高增殖细胞的CLC-3 氯通道基因表达明显大于静止期细胞∞1。CLC-3在宫颈癌组织中的表达情况尚不清 表达情况，探讨CLC一3与宫颈癌发生、发展的关系。 实验材料与方法 一、研究对象 取自中国医科大学附属第一医院妇科2005年6月至2007年9月宫颈活检和 手术切除之标本，宫颈癌70例，其中有10例宫颈癌组织为治疗前和放化疗两周时 先后取材，正常宫颈组织标本10例。试验标本均经组织病理学诊断证实。宫颈癌 患者的临床病理资料包括：①年龄：以40岁为界分为两组，40岁组38例及≥ 29例；③根据组织学分类：G1：高分化14例，G2：中分化40例，G3：低分化(或 未分化)16例；④治疗前后：同一患者治疗前及放化疗两周时配对，共10对。 二、主要试剂 RNAiso RNAPCRKi Reagent(TotalRNA提取试剂)，TaKaRat(AMv)Ver3．0(宝 7 TaKaRa公司合成。 三、方法 1、总RNA提取 宫颈组织约50-100mg，利用RNAisoReagent(TotalRNA提取试剂)完成总RNA 提取，并用紫外分光光度计检测RNA浓度及纯度，-700冰箱保存。 ①匀浆：取新鲜宫颈组织约50-100mg，加入RNAisoReagentlml试剂，匀浆 后室温静置5min，再4C120009，离心5min。 u ②分相：取上清，转入另一EP管中加入200l氯仿，振荡15s混匀，溶液 管中。 ③沉淀：在上清液中加入等体积的异丙醇，轻摇匀30sec；室温静置lOmin 后，4。C120009，离心lOmin；小心吸弃上清液。 混匀30sec；4C120009，离心5min，吸弃上清液；室温下干燥，使乙醇自然挥发。 ⑤溶解：向沉淀中加入30ulDEPC水，使之溶解。 ORNA纯度的测定：经紫外分光光度仪测oD值，计算oD缃／0D弱。比值，检测RNA 40×稀释倍数／1000)后，-70℃保存。 2、cDNA的合成 反转录反应液 MgCL 1 2 10XRTBuffer dNTPMixture RNaseInhibitor ReverseTranscriDtase l““n 01 Primer l dT——Adaptor igo RNaseFree l dH，0 RNA 扑墨}主}一咖m一…扑吣m娜m卟矶卟 l Total