PPAR-γ、EGR-1在前列腺癌中的表达及其意义.pdfVIP

·论文· PPAR-Y、EGR-1在前列腺癌中的 表达及其意义 刖 吾 前列腺癌是欧美国家重要的男性肿瘤，在我国的发病率呈逐年上升的趋势， 绝大多数为腺癌。尽管前列腺癌发病的分子机制尚未完全阐明，但其发生发展也 是一个涉及多因素多步骤多基因的过程。如何早期诊断前列腺癌并根据其生物特 点采取合理的治疗方法，提高前列腺癌患者总体生存率，一直是泌尿科学者研究的 重要课题。近年来随着分子生物学技术的发展，对过氧化物酶体增殖物激活受体 Y在基因水平上对人类肿瘤的作用机制及其配体的治疗作用正受到极为广泛的研 究。Egr-1属于转录调节因子，包括PPAR-,y在内许多基因的启动子都有功能性 中的表达情况，探讨PPARl,、Egr-1与前列腺癌的关系。 实验材料与方法 一、材料 1、临床资料 实验组44例前列腺癌标本及lO例前列腺良性增生标本均取自接受手术治疗 患者的存档蜡块，全部经术后病理诊断确诊。前列腺癌分期标准采用ABCD分期 76岁。Gleason病理分级G1级18例，G2级16例，G3级8例，G4级2例。 2、主要试剂 (1)sP免疫组化试剂盒：博士德生物工程有限公司； 7 (2)抗PPAR-7多抗：博士德生物工程有限公司； (3)抗EGR-1多抗：博士德生物工程有限公司； (4)二甲苯、多聚赖氨酸、无水乙醇、3096过氧化氢、苏木素、伊红：北京试剂三 厂。 3、主要溶液配制 B液加入450ml蒸馏水中，调 檬酸钠溶于100ml蒸馏水中为B液，将9mlA液和41ml pH值6．0。 (2)PBS液(0．01mol磷酸盐酸缓冲液，PH7．2)：取磷酸二二氢钠99，磷酸氢二 钠64．549，氯化钠1609，调pH7．2加水定容2000ml。 (3)3％过牟惝甲醇掖：取300,6过牟憾10ml溶于90ml甲醇镕液中。 50 DAB中，完全溶解后过滤， (4)DAB-H202显色掖：将TBSml溶解于25mg 0．15ml。 显色前加3096H202 4、主要仪器 (1)自动脱水机 (2)生物组织包埋机 (3)石蜡切片用冷台 (4)恒温摊片烤片机 (5)切片机 (6)光学显微镜 (7)计算机显微图像分析仪 二、实验方法及结果判定 1、免疫组化实验 Dm切片， 所有标本均经1嗍哥尔马林液固定24h，常规石蜡包埋存档。蜡块采用5 连续切片4张，用已知阳性片作为阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。 检测PPAR-7和EGR-1均采用免疫组化染色S-P法： (1) 石蜡切片常规脱蜡至水； (2) PBS洗三次，每次5分钟； (3) 396过氧化氢甲醛处理10分钟； (4) 水洗； PH7．4 (5) 高温高压修复(O．01M EDTA)； (6) 降至室温水冼； (7) PBS液冲洗3次，每次5分钟； (8) 滴加1096正常血清，10分钟； (9) 吨4℃过：夜； (10)升至室温，PBS洗三次，每次5分钟； (11)二抗37℃30分钟； (12)PBS洗三次，每次5分钟； (13)加链霉菌抗生物素蛋白谴化物酶，室温孵育10分钟； (14)PBS揪，每次5分钟； (15)DAB显色5分钟； (16)自来水冲洗，苏木素复染，中性树胶封固； 2、 结果判定 以细胞内出现黄色或棕黄色颗粒者为阳性．结果判定在盲法下进行，先于低倍 下随机选取5个视野(不重叠，不重复)彩色数码摄像机取图，计算机显