等温滴定量热技术-现代生物学仪器分析-武汉大学.PDF

等温滴定量热技术等温滴定量热技术等温滴定量热技术等温滴定量热技术 ((((IsothermalIsothermal titrationtitration calorimetrcalorimetryyyy)))) 梁梁梁梁 毅毅毅毅 ((武汉大学生命科学学院武汉大学生命科学学院)) 等温滴定量热法通过高灵敏度、高 自动化的等温滴定量热仪连续和准自动化的等温滴定量热仪连续和准 确地监测和记录一个变化过程的量确地监测和记录一个变化过程的量 热曲线热曲线，，原位原位((in situ)) 、、在线在线((on-line)) 和无损伤地同时提供热力学和动力 学信息 等温滴定量热法的优点 等温滴定量热法不干扰蛋白质和核酸的生理功 能能，，具有非特异性的独特优势具有非特异性的独特优势，，即对被研究蛋即对被研究蛋 白质和核酸体系的溶剂性质白质和核酸体系的溶剂性质、、光谱性质和电学光谱性质和电学 性质等没有任何限制条件 样品用量少样品用量少，，方法灵敏度高方法灵敏度高，，测量时不需要制测量时不需要制 成透明清澈的溶液 量热实验完毕的样品未遭破坏，还可以进行后 续生化分析续生化分析 等温滴定量热法的局限性 等温滴定量热法缺乏特异性等温滴定量热法缺乏特异性。。但由于蛋但由于蛋 白质和核酸本身具有特异性，因此这种 非特异性方法有时可以得到用特异方法非特异性方法有时可以得到用特异方法 得不到的结果得不到的结果，，这有助于发现新现象和这有助于发现新现象和 新规律  实验是通过滴定反应物到 VP-ITC 含有反应所必须的另一反含有反应所必须的另一反 结构原理 应物的样品溶液中。每次 滴定后滴定后，，反应热放出或吸反应热放出或吸 收，这些都可以被ITC所 检测到。检测到的热效应 的热力学分析提供了结合 反应相关的能量过程的定 量特征量特征，，可以直接测量与可以直接测量与 常温下发生的反应过程相 关的能量学参数关的能量学参数 ITC仪器参数和特点 VP-ITC仪器最小可检测热功率2 nW ，最小可检测热 效应0.125 J ，生物样品最小用量0.4 g ，温度范围 0  2 C - 80 C ，滴定池体积1.43 ml；iTC200和最新型号的 PEAQ-ITC的滴定池体积则更小，仅为200 l  实验时间较短实验时间较短((典型的典型的ITCITC 实验只需实验只需3030-6060分钟分钟，，并加上并加上 几分钟的响应时间) ，操作简单(整个实验由计算机控 制制，，使用者只需输入实验的参数使用者只需输入实验的参数，，如温度如温度、、注射次数注射次数、、 注射量等，计算机就可以完成整个实验，再由Origin 软件分析软件分析ITC得到的数据得到的数据) ITC的用途和应用范围 获得生物分子相互作用的完整热力学参数，包括结合 常数常数、、结合位点数结合位点数、、摩尔结合焓摩尔结合焓、、摩尔结合熵摩尔结合熵、、摩尔摩尔 恒压热容，和动力学参数(如酶活力、酶促反应米氏常 数和酶转换数数和酶转换数)) 蛋白质-蛋白质相互作用( 包括抗原-抗体相互作用和分 子伴侣-底物相互作用)；蛋白质折叠/去折叠；蛋白质- 小分子相互作用以及酶-抑制剂相互作用；酶促反应动 力学；药物-DNA/RNA相互作用；RNA折叠；蛋白质- 核酸相互作用；核酸-小分子相互作用；核酸-核酸相 互作用；生物分子-细胞相互作用；…… College of Life Sciences, WuhanWuhan UniversityUniversity VP-ITC