简单染色法与革兰氏染色目的了解简单染色法与革兰氏染色得操作.docVIP

簡單染色法與革蘭氏染色 目的 了解簡單染色法與革蘭氏染色得操作與原理 簡單染色法：以甲烯藍作為染劑，檢驗口腔黏膜細胞、大腸桿菌、枯草桿菌、及未知溶液，檢測出各水樣中菌體的形狀及顏色變化。 革蘭氏染色：以結晶紫、碘液、乙醇及沙番紅，檢測大腸菌類、枯草桿菌、及未知溶液，檢測出各水樣中菌體的形狀及顏色變化。 原理 簡單染色法：用單一染料進行染色，操作簡便，是於菌體一般形狀和細菌排列的觀察。經染色處理，微生物細菌與周圍環境對比效果增加，易於檢視其大小、形狀、排列情形，亦可更進一步鑑別不同微生物菌體的型態及構造。 簡單染色法還可用於驗證細菌是否為死菌或活菌，即所謂『活體染色』，其原理是利用中性染料的稀釋液，對細菌進行染色，當細菌失去活性成為死菌時，菌體會被染料所滲透，而活細菌則否。 革蘭氏染色：用來區別細胞間或細包某部位的染色及鑑別菌體或菌體中的特殊部位，染色結果將微生物分成兩類，即革蘭氏陽性與革蘭氏陰性細菌。 革蘭氏染色的原理主要是利用僅存於革蘭氏陽性菌體的核醣核酸鎂鹽 – 蛋白質 – 醣類複合物與染劑間的作用，此複合物會與染劑中的結晶及碘分子形成-種無法被酒精集水所溶解的物質，保留了複合物的生成。 細胞璧 革蘭氏陽性菌 革蘭氏陰性菌 成分 脂質量少(0~2%) 脂質量多(10~20%) 厚度 厚 薄 層數 一層 多層 染色後呈色 藍紫色 紅色 染劑 革蘭氏陽性 革蘭氏陰性 處理時間 結晶紫 細胞染成紫色 細胞染成紫色 60秒 碘液 再細胞內形成CV-I複合物，細胞殘留紫色 在細胞內形成CV-I複合物，細胞殘留紫色 60秒 乙醇 細胞脫水，發生多孔性收縮，降低CV-I滲出細胞，細胞呈紫色 脂質從細胞璧被抽出，增加多孔胞移出，呈現無色性，而CY-I從細 番紅 細胞不受影響 發生染色而變粉紅色 30秒 實驗步驟 簡單染色法： 先取一滴二段水滴於載玻片正中央，用牙籤刮取口腔內面之黏膜，混水均勻塗抹再一載玻片上。 取待測菌液一滴，均勻塗抹於一載玻片上。 自然風乾、點燃酒精燈用鑷子固定載玻片將載玻片迅速通過火焰數次。 滴上適量甲烯藍染劑後靜待60秒，用二段水沖洗載玻片的背面，利用吸水紙輕輕擦乾後，再光學顯微鏡下觀察，記載其形狀、顏色、大小及顯微鏡放大倍率。 革蘭氏染色： 將準備好的大腸桿菌、枯草桿菌及未知菌，各均勻塗抹於載玻片上，並加熱固定。 依結晶紫、碘液、酒精、沙番紅之順序及時間，進行染色。 再光學顯微鏡下觀察，紀錄其形狀、顏色、大小及顯微鏡放大倍率。 問題 試述簡單染色法的原理以及在環工上之應用？ 簡單染色法原理主要是細胞表面或細胞內活化位置與染料分子產生物理反應和化學作用每種染劑對特定的細胞物質都有特殊親合力，藉由這種特性突顯出微生物的基本構造與形狀，讓我們易於找到微生物並觀察之 於廢水生物處理時可利用甲烯藍為染料進行簡單染色法，藉以判斷活性污泥系統中活菌的生長情形，以判斷了解系統操作的成效。 繪圖說明簡單染色法的實驗流程，為何流程中必須進行固定的步驟？ 滴入一滴菌液用玻片均勻塗抹開來待其自然風乾滴入適量的甲烯藍染劑後，靜待一分鐘，再用二段水沖洗背面，利用紙輕輕擦乾，然後再用光學顯微鏡觀察，其菌體顏色、大小及放大倍率固定的目的有三：1.殺死細菌以固定其型態；2.使菌體黏附於載玻片上；3.改變細胞璧的通透性，增加對染料的親合力。 滴入一滴菌液 用玻片均勻塗抹開來 待其自然風乾 滴入適量的甲烯藍染劑後，靜待一分鐘，再用二段水沖洗背面，利用紙輕輕擦乾，然後再用光學顯微鏡觀察，其菌體顏色、大小及放大倍率 何謂活體染色？ 活體染色，其原理是利用中性染料的稀釋液對細菌做染色，當細菌成為死細菌時，菌體會被染料所滲透，而活細菌則否。 試述革蘭氏染色法之原理、實驗步驟及各階段染色結果？你們這組所得的實驗結果為何？ 原理：利用細菌細胞璧脂質含量多寡而將細菌染成不同顏色，被染成紫色的細菌稱為革蘭氏陽性菌；被染成紅色的細菌則為革蘭氏陰性菌，此為細菌分類的重要依據。除染色結果不同外，此兩類的細菌再生理上也有所不同。 實驗步驟及各階段染色結果 初染：先將結晶紫染色，將所有細菌都染為紫色。 媒染：以碘液處理，碘和結晶紫形成複合物使結晶紫對細胞璧親合力加強。 脫色：利用酒精處理，使細胞璧上的脂質被溶解，細胞璧含脂質較多的革蘭氏陰性菌變成為無色，而細胞璧含脂質較少的革蘭氏陽性菌仍保持紫色。 複染：以沙番紅做第二次染色，無色的革蘭氏陰性細菌會被染為紅色。 大腸菌 枯草桿菌 未知液 結晶紫 紫色 紫色 紫色 碘液 褐色 褐色 褐色 乙醇 無色 無色 無色 沙番紅 紅色 藍紫色 紅色 實驗結果同上 !! 微生物進行革蘭氏染色時應注意的事項為何？ 染色時，脫色過度時可使初染流失，使革蘭氏陽性菌成為革蘭氏陰性菌，但脫色不足不能完全去除複合物，結果是革蘭氏陰性菌變成