课件：酶工程基本原理.ppt

* * * * * ４ pH对反应述度的影响 用酶活力对pH作图，便得到一条钟形曲线。 图 pH对酶活力的影响 pH 酶活力 pH对酶活力的影响主要表现在以下几个方面： ① pH的改变影响酶的空间构象，从而引起酶活力的改变。 ② pH影响酶活性中心催化基团的解离，影响酶与底物的亲合力或催化活性。 ③ pH影响底物的解离状态，改变底物的可给性。 CH2.2 酶催化反应的动力学 pH对反应述度的影响 CH2.2 酶催化反应的动力学 温度对反应述度的影响 ５ 温度对酶促反应述度的影响 从实验结果来看，温度对酶活力的影响，类似于pH对酶活力的影响，以酶活力对温度作图，便得到一条钟形曲线。 温度 酶活力 温度对酶活力的影响，主要表现在两个方面，一方面温度的改变影响着酶的稳定性，在低温条件下，主要表现为可逆行失活，随温度的恢复酶活力也得到恢复；在高温条件下，表现为不可逆行失活。另一方面，温度直接影响酶促反应的进行，根据Arrhenius方程： k=Ae-Ea/RT 可以看出，述度常数k与绝对温度T成正比。 影响酶促反应的因素 五.激活剂对酶促反应速度的影响 凡是能提高酶活性的物质，都称为激活剂。 无机离子或简单有机化合物对酶的激活。 1、?? 无机离子的激活作用 （1）金属离子：K+ 、Na+、Mg2+ 、Zn2+、Fe 2+ 、Ca2+ （2）阴离子：cl-、Br -、PO43- （3）氢离子 ★不同的离子激活不同的酶。 ★不同离子之间有拮抗作用和可替代作用，如Na+与K+、Mg+与Ca+之间常常拮抗，但Mg+与Zn+常可替代。 ★ 激活剂的浓度要适中，过高往往有抑制作用，1~50mM 2、?? 简单有机分子的激活作用 ①还原剂（如Cys、还原型谷胱甘肽）能激活某些活性中心含有—SH的酶。 ②金属螯合剂（EDTA）能去除酶中重金属离子，解除抑制作用。 3、蛋白酶对酶原的激活 ? 抑制剂对酶促反应速度的影响 变性作用(denaturation)： 抑制作用(inhibiton)：使酶活力下降或丧失但并不引起酶蛋白变性 变性剂没有选择性 抑制剂有不同程度的选择性 研究抑制剂对酶的作用有重大的意义： （1）药物作用机理和抑制剂型药物的设计与开 （2）了解生物体的代谢途径，进行人为调控或代谢控制发酵 （3）通过抑制剂试验研究酶活性中心的构象及其化学功能基团，不仅可以设计药物，而且也是酶工程和化学修饰酶、酶工业的基础 （二）抑制作用的类型 1、不可逆的抑制作用 抑制剂与酶活性中心（外）的必需基团共价结合，使酶的活性下降，无法用透析、超滤等物理方法除去抑制剂而使 酶复活。 2、 可逆的抑制作用 抑制剂与酶蛋白非共价键结合，可以用透折、超滤等物理方法除去抑制剂而使 酶复活。 （1）竞争性抑制（Competitive inhibition） ?抑制剂具有与底物类似的结构，竞争酶的活性中心，并与酶形成可逆的EI复合物，阻止底物与酶结合。 可以通过增加底物浓度而解除此种抑制。 丙二酸、戊二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制 （2）非竞争性抑制 底物和抑制剂可以同时与酶结合，但是，中间的三元复合物ESI不能进一步分解为产物，因此，酶的活性降低。 抑制剂与酶活性中的以外的基团结合，其结构可能与底物无关。 不能通过增加底物的浓度的办法来消除非竞争性抑制作用 某些重金属离子对酶的抑制属于非竞争性抑制：Cu2+、Hg2+、Pb2+ （3）、?? 反竞争性抑制 酶只有在与底物结合后，才能与抑制剂结合。E+S→ES+I →ESI≠ P 常见于多底物的酶促反应中 （三）可逆抑制作用与不可逆抑制作用的鉴别 1、通过透析、超滤、凝胶过滤等 2、通过V-E速度曲线 3、通过可逆抑制剂的动力学曲线可以区分三种可逆抑制作用 1、?? 竞争性抑制： 相对活力： 抑制分数： 动力学方程： （Ki为EI的解离常数） ★抑制程度决定于[I]、[S]、Km和Ki 竞争性可逆抑制图示 ★Vmax不变 ★Km变大，而且随[I]浓度的增大而增大 交于y轴 竞争性抑制作用小结： （1） Vmax不变，Km变大。 （2）抑制程度决定于[I]、[S]、Km和Ki A. 抑制程度与[I]成正比，与[S]成反比 [I]一定，增加[S]，可减少抑制程度。 [S]一定，增加[I]，可增加抑制程度。 B. 在一定[I]和[S]下， Ki越大，抑制作用越小，Km值愈大，抑制程度愈大。 2、?? 非竞争性抑制 相对活力： 抑制分数： ★抑制程度决定于[I]和Ki ，与底物的Km和[S]无关 动力学方程： 非竞争