课件：溶血性贫血 ().ppt

* * * Ham试验 PNH患者不同时间尿样 4）CD55 CD59检测 【原理】CD55，CD59是补体调节蛋白，具有GPI锚定蛋白作用。PNH患者红细胞和粒细胞上GPI锚缺陷，无法结合在细胞膜上，导致对补体敏感，容易发生溶血。 【参考范围】外周血中CD55，CD59阴性红细胞和中性粒细胞均5％ 【临床意义】PNH患者该类细胞10％， 主要确诊试验 3. PNH相关检测 PNH诊断 1.初筛试验 血管内溶血的特点 血浆游离血红蛋白增高，结合珠蛋白(Hp)降低，血红蛋白尿、尿中出现含铁血黄素、蔗糖溶血试验等。 2.诊断试验 酸化血清溶血试验(Ham’s试验)、蛇毒因子溶血试验、CD55和CD59检测。 （二）红细胞酶缺陷的检测 自身溶血试验及纠正试验 高铁血红蛋白还原试验 氰化物-抗坏血酸试验 变性珠蛋白小体生成试验 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）活性检测 丙酮酸激酶荧光筛选试验和活性测定 1. 自身溶血试验及纠正试验 【原理】细胞内酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 G-6-PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障碍，不能提供足量ATP，红细胞在自身血浆中温育48小时，不能继续从血浆摄取葡萄糖作能量来源，ATP减少，不能维持红细胞内钠泵作用，导致溶血增加。在温育过程中分别加入葡萄糖和ATP作纠正物，看溶血能否纠正。 【参考值】正常人轻微溶血，溶血度 3.5%；加葡萄糖、ATP溶血明显纠正， 溶血度1%。 【临床意义】 遗传球、遗传性非球形细胞溶血的鉴别 遗传性球形细胞增多症 遗传性非球形细胞性溶贫 （Ⅰ型）葡萄糖6磷酸脱氢酶缺陷症 （Ⅱ型）丙酮酸激酶缺陷症 孵育48h后溶血 增强 增强 增强 加葡萄糖后溶血 明显纠正 部分纠正 不能纠正 加ATP后溶血 明显纠正 部分纠正 纠正 1. 自身溶血试验及纠正试验 2. 高铁血红蛋白还原试验 【原理】在有足量的NADPH存在下，反应液中的高铁血红蛋白能被还原成（亚铁）血红蛋白。当G-6-PD含量正常时，由磷酸戊糖途径生成的NADPH的数量足以完成上述反应。反之，则还原速度减慢，甚至不能还原。 【参考值】还原率75%；高铁血红蛋白0.3-1.3g/L。 【临床意义】G-6-PD缺陷，还原率显著降低。本试验是反映红细胞对高铁血红蛋白的还原能力，特异性较低，可用作G-6-PD缺乏的筛选试验。 【原理】抗坏血酸钠与HbO2反应生成H2O2，氰化钠能抑制过氧化氢酶使H2O2不受影响，从而使H2O2与GSH发生反应，产生氧化型谷光氨肽，后者需要NADPH使其再还原为GSH。 如红细胞内缺乏催化NAPDH形成的酶（G-6-PD），GSH产生减少，H2O2蓄积，HbO2被氧化成为棕色的高铁血红蛋白。 【临床意义】正常血液几小时后才变为暗色；G-6-PD缺乏症患者血液呈棕色（阳性反应），纯合子2h，杂合子3-4h。可做为诊断G-6-PD缺乏症的一种过筛试验。 3. 氰化物-抗坏血酸试验 4. 变性珠蛋白小体生成试验 【原理】G-6-PD缺乏可致红细胞内的GSH含量减少 ，随之出现高铁血红蛋白增高，最后形成变性珠蛋白小体（Heinz bodies）。取G6PD缺陷患者血液，加乙酰苯肼，37℃温育2-4h，推薄血片，1%煌焦油蓝染色，计算含5个或更多珠蛋白小体的红细胞百分率。 【参考值】30% 【临床意义】G6PD缺陷症，不稳定Hb、HbH病等常高于45%。 5. 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）活性检测 【原理】在G6PD和NADP存在下，G6PD能使NADP还原成NADPH，后者在紫外线照射下会发出荧光。进一步可用紫外线分光光度测量法，对G-6-PD活性作定量测定。 【参考值】正常人有甚强荧光。 【临床意义】G6PD缺陷者常延迟出现或不出现荧光点。可作G-6-PD较特异的筛选试验。 6. 丙酮酸激酶荧光筛选试验和活性测定 【原理】在ADP存在下，PK催化烯醇式磷酸丙酮酸变为丙酮酸，在辅酶I还原型（NADH）存在下，丙酮酸被乳酸脱氢酶作用变为乳酸，若荧光标记于NADH上，此时有荧光的NADH变为无荧光的NAD。进一步可用紫外分光光度测量法，对丙酮酸激酶活性作定量测定。 【参考值】正常PK活性荧光在20min内消失。 【临床意义】丙酮酸激酶缺乏时，常延迟消失或达60min仍不消失，可作丙酮酸激酶较特异的筛选试验。 （三）珠蛋白生成异常的检测 血红蛋白电泳 胎儿血红蛋白酸洗脱试验 胎儿血红蛋白测定或HbF碱变性试验 HbA2 定量测定 限制性内切酶谱分析 【原理】利用各种血红蛋白的等电点不同的特点，在一定pH缓冲液中所带的正、负电荷不同，经电泳后各血红蛋白的