从纤维素中生产异丁醇的分解纤维素梭菌的代谢工程.pptVIP

从纤维素中生产异丁醇的分解纤维素梭菌的代谢工程 Metabolic Engineering of Clostridium cellulolyticum for Production of Isobutanol from Cellulose 研究背景 生物燃料的生产过程通常包括预处理、酶解、发酵等生产过程，新的纤维素异丁醇生产方法将这些步骤进行了整合，只需一步就可以完成。目前，研究人员尚未从自然界中分离到可将以上步骤进行整合的菌株，因此研究人员利用基因改造手段构建了一种解纤维素梭菌，原始菌株是从腐烂的草中分离到的，菌株可以降解纤维素并直接合成异丁醇，这项工作是在之前构建异丁醇合成途径的工作基础上完成的。 过去的研究中曾经对解纤维素梭菌进行基因改造以提高乙醇产量，并对菌株做了深入的研究，对菌株基因组进行了测序，此次研究工作使用了美国能源部联合实验室提供的解纤维素梭菌的基因组序列，在基因改造中，利用了原始菌株的纤维素分解活性和氨基酸合成途径，并将反应中间体由原来的乙醇合成前体改造为多元醇合成前体。 材料和方法 细菌菌株和质粒 限制性内切酶，磷酸酶，连接酶，KOD DNA聚合酶用于克隆技术。通过欧陆分析MWG操纵子，合成了寡核苷酸。 化学品 除非另外指出，商用试剂，酶和辅酶由Sigma化学公司（圣路易斯，密苏里州）提供。 媒介和培养 在琼脂平板上，将0.8％ （重量/