红枣烂果病.docVIP

新疆红枣烂果病病原鉴定实验设计方案 摘要：新疆红枣烂果病在新疆大规模发生，尤其是南疆个别地区，塔里木盆地周边烂果病的发生更加常见。给农民带来了严重的经济损失。所以我们要鉴定它的病原来防制烂果病的大发生。红枣烂果病的病原鉴别试验分为两哥方面：采样，田间调查和病原鉴定。 关键词：新疆 红枣 病害 病原 分离法 真菌 细菌 一 采样，田间调查 采样：南疆塔里木盆地周边枣园。 田间调查：经调查红枣烂果病是普遍发生的病害，在红枣，酸枣和沙枣上都有发生；是侵染性病害，有明显发病中心。 病因学主要是研究病害发生的原因。植物侵染性病害发生的原因是由病原物，寄主植物和环境条件三方面因素决定的，即所谓病害三角。病害是否发生和发生的轻重，决定于上述三方面的因素。 一 分离前的准备工作 1．工作环境的清洁和消毒 分离培养一般在无菌室、无菌箱或无菌工作台（超净工作台）上进行，无菌室和无菌箱要经过喷雾除尘，并用药物或紫外线照射消毒（常用消毒药物为70%酒精，2%煤酚皂液，5%石炭酸液等喷雾。若用紫外线灯照射则需20-30分钟）。在没有上述设备条件时，在清洁房间里关闭门窗，避免空气流动，经过喷雾除去空气及地面灰尘后进行操作，也可获得较好的结果。工作前擦净桌面，最好铺上湿纱布。将所需用的物品按次序放在工作台上，避免工作时走动，工作人员最好穿上灭菌后的工作服，带上口罩，并用肥皂洗手，用70%酒精或0.1%新洁尔灭擦手。 2．分离用具的消毒 凡是和分离材料接触的器皿（刀、剪、镊、针等）都要随时（至少在使用时）保持无菌，将这些用具浸于70%酒精中，使用时在灯焰上灭菌烧去酒精，如此2-3次（刀、剪、镊等不宜在灯焰上烧时过长，以防退火）。再次使用时必须重复灭菌。培养皿、试验等要经过干热灭菌。培养基及洗涤或稀释用蒸馏水都需要事先经过高压蒸气灭菌。 3．分离材料的选择 用新发病的植株、器官或组织做为分离材料，可以减少腐生菌的污染。任何植物坏死部分的内部或表面，都可能有腐生微生物的孽生，所以一般斑点病害应从邻近健全组织，即从病、健组织交界处获得分离材料。 二 病原鉴定 红枣烂果病的病原有可能是真菌，细菌，真菌+细菌或者是专性寄生菌，因此我们要分别针对它们进行实验设计。实验主要包括：病原分离，纯化，致病性测定和病原鉴定。 细菌 植物病原细菌一般都是用稀释分离法。病原细菌在组织中的数量很大，稀释培养可以使病原细菌与杂菌分开，形成分散的菌落，容易分离得到纯培养。组织分离法对病原细菌是不适用的，原因是它不能使病原细菌与杂菌分开，杂菌生长快，会抑制病原细菌的生长。稀释分离有以下两种方法。 1 培养皿稀释分离法 取灭菌的培养皿3个，每个培养皿中加灭菌水0.5ml，切取约4mm见方的小块病组织，经过表面消毒和灭菌水洗过3次以后，移在第一个培养皿的水滴中。用灭菌的玻棒将病组织研碎，静置10～15min，使组织中的细菌流入水中(配成悬浮液)，然后用灭菌的移植环从第一个培养皿中移植3环到第二个培养皿中，充分混合后再移植3环到第三个培养皿中。然后，将溶化的琼胶培养基冷却到45℃左右，倒在三个培养皿中。冷却凝固后，将培养皿翻转，在适温下培养。培养皿用记号笔注明分离材料、日期和稀释编号。 细菌悬浮液的配法有时影响分离的效果。一般植物病原细菌，用灭菌水稀释是适宜的。有时改用灭菌的生理食盐水(0.85%的NaCl)或肉汁冻培养液稀释比较好。如水稻白叶枯病细菌，用蛋白胨水或粘土悬浮液稀释的，培养后形成菌落的数目比用清水稀释的多。粘土的作用大致是细菌团聚在土粒上，更容易形成菌落。 平板划线分离法 取小块病组织，经过表面消毒和灭菌水洗过2次以后，放在灭菌载玻片上的灭菌水中，用灭菌玻棒研碎。静置一定时间，用灭菌的移植环蘸取以上组织液在琼胶平板上划线培养; 先在平板的一侧顺序划3～5条线，再将培养皿转60°将移植环灭菌后,从第二条线末端，顺序划出3-5条线。目的都是使细菌分开形成分散的菌落。 划线分离法的关键是要等到琼胶平板表面的冷凝水完全消失后才能划线，否则细菌将在冷凝水中流动而影响形成单个分散的菌落。为了加快消除冷凝水，可以将培养皿在37℃的温箱中放一二天，或者在无菌的条件下，将培养皿的盖打开，翻转培养皿斜靠在盖上，在50℃的干燥箱中干燥30min。 真菌 真菌的分离 1 分离的准备工作 分离操作间的清洁：喷雾、紫外灯 超净工作台的清洁：桌面应擦洗干净，如有必要时可用70%酒精擦洗。工作前最好是将所需用的物品都放在工作台上，避免工作时多走动，既浪费时间，又容易带来杂菌。 [1] 组织分离法 切取小块病组织，经表面消毒和灭菌水洗过以后，移在琼胶培养基平板上培养。切取组织的大小要适宜，一般是切取4～5mm的小块。组织太大，带的杂菌多；组织太小，其中的病原菌在消毒时容