苯丙氨酸的紫外吸收峰为260nm.PPT

常用沉淀蛋白质的方法 1. 盐析法 低盐浓度可使蛋白质表面吸附某种离子，导致其颗粒表面同性电荷增加而排斥加强，同时与水分子作用也增强，从而提高了蛋白质的溶解度；高盐浓度时，因破坏蛋白质的水化层并中和其电荷，促使蛋白质颗粒相互聚集而沉淀，称为盐析作用（salting out）。 2. 有机溶剂沉淀法 在蛋白质溶液中加入一定量的与水可互溶的有机溶剂(如乙醇、丙酮、甲醇等)能破坏蛋白质分子表面的水化膜，使蛋白质的解离度降低，相互聚集而从溶液中析出。在等电点时加入有机溶剂更易使蛋白质沉淀。 3. 重金属盐沉淀法 蛋白质在pH大于pI的溶液中呈负离子，可与重金属离子（Cu2+、Hg2+、Pb2+、Ag2+等）结合成不溶性蛋白质盐而沉淀，沉淀条件是溶液pH＞pI。重金属盐沉淀蛋白质往往会使蛋白质变性。 4. 生物碱试剂沉淀法 生物碱试剂如苦味酸、鞣酸、磷钨酸、磷钼酸、三氯乙酸等的酸根离子可与带正电荷的蛋白质结合形成不溶性盐而沉淀。 第 五 节 蛋白质的分离纯化 1. 样本的选择 原则是样本中应含大量的所需蛋白质，且来源方便。当然，由于目的不同，有时只能用特定的原料。 2. 组织细胞破碎 某些蛋白质以可溶形式存在于体液中，可直接分离。但大多数蛋白质存在于细胞内，并结合在一定的细胞器上，故需先破碎