波动性高糖对氧糖剥夺再复供神经元存活的影响.PDFVIP

中华危重病急救医学  2019年1月第31卷第 1期  Chin Crit Care Med，January   2019，Vol.31，No.1 · 61  · ·论著 · 波动性高糖对氧糖剥夺/再复供  神经元存活的影响             1 1 2 1 3 1 4 1 （ ） ， ；2 （   318000 ） ， ；3 （ ） ，   318000   4 ； ，   318000   318050 ： ， ： Email 1063559984@ 【 】 摘要 目的  探讨波动性高糖对氧糖剥夺/再复供（OGD/R）后神经元存活的影响。方法  原代培养小鼠 海马神经元，待细胞融合达到80%左右时传代培养。取对数生长期细胞置于缺氧状态（37 ℃、5% CO 、95% N ） 2 2 的培养箱中模拟细胞缺氧，将培养液更换为无糖Hank平衡盐溶液（HBSS）模拟细胞缺糖；设常糖常氧对照组。 细胞缺氧缺糖处理6 h后，倒置相差显微镜下观察细胞形态，用CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测细胞活性，再 进行分组实验。将细胞随机分为4组，分别采用含不同浓度葡萄糖培养基，置于常氧、5% CO 、37 ℃培养条件2 下继续培养72 h，制备OGD/R模型模拟细胞缺血/再灌注。低糖对照组用含5.5 mmol/L葡萄糖的培养基培养； 恒定高糖组用含33.0 mmol/L葡萄糖的培养基培养；波动高糖组日间用含33.0 mmol/L葡萄糖的培养基培养3 h， 再用含5.5 mmol/L葡萄糖的培养基培养2 h，交替3次，夜间用含33.0 mmol/L葡萄糖的培养基过夜；高渗对照组 用含5.5 mmol/L葡萄糖的培养基与甘露醇配制，渗透压与恒定高糖组相同，有效糖浓度与常糖常氧对照组相同， 以排除高糖培养基引起的渗透压变化对结果的影响。各组细胞培养72 h后，倒置相差显微镜下观察细胞形态学 改变；用CCK-8试剂盒测定细胞活性；用流式细胞术测定细胞凋亡率。结果  倒置相差显微镜下显示，常糖常 氧对照组细胞饱满，折光性强，胞核明显，突起清晰，细胞活性较高。缺氧缺糖处理6 h后，细胞皱缩，折光性差， 核质不清，突起不清晰，细胞活性较常糖常氧对照组明显降低（A 值：0.34±0.06 比1.09±0.06，P ＜0.01），说明  细胞氧糖剥夺（OGD）模型制备成功。更换不同浓度葡萄糖继续培养72 h后，低糖对照组细胞皱缩，胞膜不完整， 核质不清，坏死细胞较多；恒定高糖组细胞折光性差，大量细胞漂浮，胞核不明显；而波动高糖组细胞形态正常， 细胞折光性稍降低，坏死细胞较少；高渗对照组与恒定高糖组细胞状态接近。与低糖对照组和恒定高糖组比较， 波动高糖组细胞活性明显升高（A 值：2.04±0.15 比0.64±0.18、1.16±0.16，均P ＜0.01），细胞凋亡率明显降低 〔（59.60±2.55）% 比（78.15±15.77）%、（95.60±0.14）%，均P ＜0.05〕；而高渗对照组细胞活性和细胞凋亡率与 恒定高糖组比较差异无统计学意义〔细胞活性（A 值）：1.07±0.07 比1.16±0.16，细胞凋亡率：（87.80±4.53）% 比（95.60±0.14）%，均P ＞0.05〕。结论  波动性高糖对OGD/R后神经元存活可能有一定的保护作用。 【 】 波动性高糖； 氧糖剥夺/再复供； 海马神经元； 存活 关键词 基金项目： 台州市科技项目（15yw02-3）；