琼脂糖等电聚焦法快速测定碱性磷酸酶同工酶-中国骨质疏松杂志.PDF

CHINESEJOURNALOFOSTEOPOROSISVo1．4No．31998 琼脂糖等电聚焦法快速测定碱性磷酸酶同工酶 王 玻 邓 君 杨振华 摘要 奉研究的目的是建立高灵敏度分离碱性磷酸酶同工酶的方法，具体采 用琼脂糖等电聚焦法分离其同工酶，电泳前先用神经氨酸苷酶对几种组织提取蔽 和病人血清进行处理。该法可将肝、骨、小肠以及胎盘同工酶分离出多条区带，具 有操作简单、灵敏度和分辨率高、重复性好的优点。 关键词 碱性磷酸酶同工酶 琼脂糖等电聚焦 神经氨酸苷酶 Rapiddetermination alkalineph0phn isoe~ esbyagar~eIseelectrtcfocusiag WangBo，DengJunandYangZkenhua Laboratory，BeringHospital，Beijing100730tChina Abstract Theob)ectiveof01,12studywastodevelopahighresolvingpowermethodtodetectalka— linepkosphataseisoenzymes．Isoelectricfocusing forseparatingalkalinephosphataseisoenzylneswases— tablished．Treatedbyneuraminidase．alkalinephosphataseisoenzymesboth inseveralkindsofhuman t~suesandpatientserurrlcanbeseparatedintosevera1bandssimultaneously．Themethoddemonstrated highresolvingpowerthighsenskivityandgood reproducibility． Keywords Alkalinephosphataseisoenzymes Agaroseisoelectriefocusing Neuraminidase 碱性磷酸酶(ALP)广泛存在于人体各种组 1材料和方法 织器官中，如肝脏、骨、小肠、胎盘、。肾、肺等，它 们至少来源于四种不同的基因位点，自从报道 1．1 仪器 存在ALP以来，此酶一直用于诊断肝、骨的疾 等电聚焦(IEF)采用LKB一2117多用途 病。 电泳仪，扫描使用 日本常光公司的Micon一2O 目前已有多种不同的方法分离ALP同工 光密度扫描仪。 酶，如醋酸纤维薄膜电泳法0、琼脂糖电泳 1．2 试剂 法L、聚丙烯酰胺电泳法0]、聚丙烯酰胺等电聚 4o 两性电介质(pH3．0～9．5)由军事医 焦(IEF)法 “以及免疫学法0：等，但这些方法要 学科学院生产，琼脂糖为Pharmacia公司生产， 么无法很好分离肝和骨同工酶；要么灵敏度和 甘油为北京市燕京制药厂生产，山梨醇由浙江 重复性较差，从而使得应用受到限制。本研究的 永嘉精细化工厂生产，a一萘磷酸钠为Rothe公 目的是建立一种高灵敏度、高分辨率分离各种 司生产，固兰B盐为Fluka公司生产，神经氨酸 ALP同工酶并定量测定的方法。 苷酶为Sigma公司生产，蛋白标准品为Phar macia公司生产。 作者单位：100735，北京医院检验科 作者简介：王玻．男，1985年毕业于苏州医学院，1991年获协和医科大学医学硬士学位．现为