细胞基质金属蛋白酶(MMP-)活性免疫捕获定量检测试剂盒.docVIP

细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）活性免疫捕获定量检测试剂盒产品说明书 （中文版） 主要用途 细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）活性免疫捕获定量检测试剂是一种旨在通过使用MMP-2特异性抗体捕获样品中的MMP-2抗原蛋白，识别并切离人工合成含硫多肽，释放出巯基，进而使用Ellman试剂，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）样品中基质金属蛋白酶2的特异活性定量检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，安全可靠。 技术背景 基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinases；MMPs）是一类结构高度同源的分泌型或膜相关性锌内肽酶的总称，因含有金属（锌、钙）离子而得名。其功能在于分解细胞外基质成分。迄今为止发现的MMPs至少有28种，几乎能降解除多糖以外的全部细胞外基质（extracellular matrix）成分，同时参与胚胎发育、形态形成、胚泡植入（blastocyst）、血管形成、组织再吸收（tissue resorption）、疾病发生，例如关节炎、癌细胞浸入转移等。根据降解的底物不同可将MMPs分为4大类：（1）胶原酶：MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和蛋白多糖；（2）明胶酶（Ⅳ型胶原酶）：MMP2、MMP9，又称明胶酶A、B，主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和弹性纤维；（3）基质溶解素：MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12，主要作用于纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、弹力纤维、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ胶原及MMP1、MMP8、MMP9；（4）膜型金属蛋白酶：MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP，主要作用于明胶、Ⅳ型胶原、MMP2。体内绝大多数细胞并不储备MMPs，当需要MMPs的信号传递到细胞后才临时合成，合成的MMPs以无活性的酶原（proenzyme）形式分泌到细胞外，随后被多种蛋白酶和非蛋白酶水解以及热处理激活，一种激活的MMPs可激活另一种MMPs，形成瀑布效应。基质金属蛋白酶-2，又称明胶酶A （gelatinase-A）或IV型胶原酶（type IV collagenase），其前体分子量为XX，激活后分子量为XX和XX。它在血清或细胞上清中浓度通常为10至200纳克/毫升。它的作用目标是天然和变性胶原蛋白（collagens）、纤维连接蛋白（fibronectin）、弹性纤维蛋白（elastin）、层粘连蛋白-5 （laminin-5）、前体肿瘤坏死因子-α（pro-TNF-α）和神经（蛋白）聚糖（neurocan）。基质金属蛋白酶-2与肿瘤发展与转移、血管形成、动脉粥样硬化等疾病有关。基质金属蛋白酶2的活性检测通过使用MMP-2特异性抗体涂板在孔板里的相应孔里，然后捕获样品中的MMP-2抗原蛋白，在胶原酶潜酶活化剂醋酸氨基苯汞（4-aminophenylmercuric acetate；APMA）的存在下，识别并切离人工合成含硫多肽（thiopeptide）底物Ac-PLG（2-mercapto-4-methyl-pentanoyl）-LG-OC2H5，释放出巯基（sulfhydryl group），进而与Ellman试剂5,5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5,5’-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）；DTNB]反应后，产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoic acid；TNB），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量测定组织基质金属蛋白酶2的特异活性。其反应系统为： 产品内容 清理液（Reagent A） XX毫升 裂解液（Reagent B） XX毫升 抗体液（Reagent C） XX毫升 缓冲液（Reagent D） XX毫升 封阻液（Reagent E） XX毫升 激活液（Reagent F） XX毫升 反应液（Reagent G） XX毫升 标准液（Reagent H） XX微升 稀释液（Reagent I） XX毫升 产品说明书 1份 保存方式 保存 标准液（Reagent H）在-70冰箱里；保存 抗体液（Reagent C） 激活液（Reagent F）和 反应液（Reagent G）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；有效保证3月 用户自备 1.5毫升离心管：用于标准样品配制和样品保存的容器 15毫升锥形离心管：用于样