类芽胞杆菌碱性果胶裂解酶的纯化与酶学性质表征.PDFVIP

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2019-04-08 发布于天津
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类芽胞杆菌碱性果胶裂解酶的纯化与酶学性质表征.PDF

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类芽胞杆菌碱性果胶裂解酶的纯化与酶学性质表征.PDF

第１１卷第６期生　物　加　工　过　程Ｖｏｌ．１１Ｎｏ．６２０１３年１１月ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＮｏｖ．２０１３ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－３６７８．２０１３．０６．００９类芽胞杆菌碱性果胶裂解酶的纯化与酶学性质表征熊　斌，应向贤，陈丽娜，谢丽萍，魏　春，汪　钊（浙江工业大学生物与环境工程学院，杭州３１００１４）摘　要：从类芽胞杆菌Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．ＷＺ００８的发酵上清液中纯化得到一个高活力碱性果胶裂解酶，经ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ４电泳估算其亚基相对分子质量为４５×１０。通过对该酶进行酶学性质研究发现：该酶能催化裂解果胶酸、低酯果胶和高酯果胶；酶催化反应最适温度范围为５５～６０ ℃，最适ｐＨ为９６，在最适条件下以低酯果胶为底物酶的比酶２＋２＋２＋２＋活达３０２１６Ｕ／ｍｇ；Ｃａ能增强该酶的活力，而Ｍｎ，Ｂａ和ＥＤＴＡ强烈抑制该酶活力；当没有Ｃａ存在时，高度２＋酯化的果胶是该酶的最适底物，在４ｍｍｏｌ／ＬＣａ存在时，该酶以果胶酸为底物比酶活最高（２５４６７Ｕ／ｍｇ）。该酶Ｎ端序列比对分析发现与类芽胞杆菌Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｌｙｔｉｃｕｓｓｔｒａｉｎ２７ｃ６４果胶裂解酶高度同源。关键词：酶学性质；酯化果胶；碱性果胶酶；纯化中图分类号：Ｑ８１４　　　　文献标志码：Ａ　　　　文章编号：１６７２－３６７８（２０１３）０６－００４２－０５ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｌｋａｌｉｎｅｐｅｃｔａｔｅｌｙａｓｅｆｒｏｍＰａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．ＷＺ００８ＸＩＯＮＧＢｉｎ，ＹＩＮＧＸｉａｎｇｘｉａｎ，ＣＨＥＮＬｉｎａ，ＸＩＥＬｉｐｉｎｇ，ＷＥＩＣｈｕｎ，ＷＡＮＧＺｈａｏ（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００１４，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｎｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｐｅｃｔａｔｅｌｙａｓｅｗａｓｐｕｒｉｆｉｅｄｆｒｏｍｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｏｆＰａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．ＷＺ００８ｇｒｏｗｎｉｎｔｈｅｐｅｃｔｉｎ⁃ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｍｅｄｉｕｍ．Ｔｈｅｓｕｂｕｎｉｔｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｏｆｔｈｅｐｕｒｉｆｉｅｄｅｎｚｙｍｅｗａｓ４ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｔｏｂｅａｒｏｕｎｄ４５ ×１０ｂｙＳＤＳ⁃ＰＡＧＥａｎａｌｙｓｉｓ．Ｉｔｓｈｏｗｅｄａｃｔｉｖｉｔｙｏｎｂｏｔｈｐｏｌｙｇａｌａｃｔｕｒｏｎｉｃａｃｉｄａｎｄｍｅｔｈｙｌａｔｅｄｐｅｃｔｉｎｓ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅｐｕｒｉｆｉｅｄｅｎｚｙｍｅｗａｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｉｎａｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｒａｎｇｅｏｆ５５ ℃ ｔｏ６０ ℃ ａｎｄａｔｐＨ９６．Ｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｐｅｃｔａｔｅｌｙａｓｅ