10例遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症分子发病机制与临床.doc

PAGE PAGE 1 10例遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症分子发病机制与临床 摘要 　　目的：探讨10例遗传性凝血因子Ⅶ(coagulationfactorⅦ，FⅦ)缺陷症基因突变类型与临床特性。 　　方法：检测凝血指标以明确诊断；用DNA直接测序法对先证者及其家庭成员FⅦ基因的全部外显子及其侧翼、5’和3’非翻译区进行分析，寻找基因突变；将含插入或缺失突变序列克隆入pMD18-TTA克隆载体中，对所得两条染色体相应序列分别测序，以确定突变在染色体上的分布。应用限制性内切酶对先证者及家系成员相应基因片段进行酶切分析，无酶切位点改变的基因片段用等位基因特异的PCR(AsPCR)方法，证实测序所发现的突变。 　　结果：在10例遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症患者中发现8种类型的基因突变，其中6390T→C(Phe4OCys)，9482G→T(Arg152Leu),和11487-9delC3种突变为国际首次报道；6种突变发生在催化区；除一种缺失突变外，其余均为点突变；所有的基因突变都来自先证者的父亲和(或)母亲。Thr359Met和Arg304Trp突变分别在4个及2个无亲缘关系的家系中重复出现。2例Thr359Met纯合突变(FⅦ：C分别为2%和3%)及1例Arg152Leu、11487-9delC及Arg304Trp复合杂合突变(FⅦ：C为1%)临床表型为重型；2例双重杂合突变(His348Gln和Thr359Met，Agr304Trp和Arg304Gln)临床表型分别为中型和无症状(FⅦ：C分别为3.4%和10%)。4例杂合突变(Phe4OCys伴有Arg353Gln杂合多态性、Thr359Met、Arg152Gln、-55c→T)FⅦ：C分别为1%、3.0%、1%、5.5%，临床表型为中型或轻型；1例-323P／P10、73G→A及Arg353Gln复合杂合多态性(FⅦ：C为1%)的临床表型为轻型。 　　结论：在10例遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症患者中发现了8种类型的FⅦ基因突变，其中3种为新突变。中国汉族人中存在导致FⅦ基因缺陷的突变热点。纯合及双杂合FⅦ基因突变FⅦ：C较低，临床出血常较重；特定的杂合突变可有临床出血倾向，FⅦ基因突变与FⅦ：C及临床表型无明显的相关性。 　　关键词：遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症；基因突变；临床表型 MoleeularGeneticsandClinicalFeaturesin10PatientswithHereditaryFⅦDefidency 丁秋兰１　王鸿利１　王学锋１　王明山２　傅启华１　武文漫１　胡翊群１ 王振义１ １上海第二医科大学附属瑞金医院上海血液学研究所，上海2OOO25； ２温州医学院附属第一医院检验科 Qiu-lan　Ding，Hong-li　Wang，Ｘue-feng　Wang　et．a1． ShanghaiInstituteofHaematology，ShanghaiSecondMedicalUniversity，Shanghai200025，China ABSTRACT Objective:ToinvestigatethemutationsandpolymorphismsoftheFⅦgeneandtheclinicalfeaturesin10patientswithhereditaryFⅦdeficiency． Methods:Thediagnosiswasvalidatedbycoagulantparameters．FⅦgenemutationswereanalysedinthepmbandsandtheirfamilymemberswithamplifiedallexons．exon-intronboundariesandthe3’，5’untranslateddomainsbyPCRandsequenceddirectly．SomePCRfragmentslinkagedintopMD18-Tvectorweresequencedforcharacterizingtheallelemutationsofinsertionsordeletions，ThePCRfragmentscontainedthemutationswerecleavedbytherelativerestrictionenzvmesorallelespecificPCR(ASPCR)wasamplifiedfornoendonucleasesitesbeingcreatedorabolishedtoconfirmthemutationsdetectedbysequencing． Results:8diferentmutationswereidentifiedin10unrelatedprobandsan