海洋微生物生物活性菌株的筛选及菌株01299次级代谢产物的研究.pdfVIP

分类号 密级—— 学校代码 10542 学号2Q12婴91501 海洋微生物生物活性菌株的筛选及菌株 01299次级代谢产物的研究 of Marine BioactiveStrainsFrom Screening and the MicroorganismsStudySecondary MetabolitestheFromStrainof01299 研 究 生 姓名 鱼 蒸 指导教师姓名、职称 叠垫筮丝撞 学 科 专 业 生药堂 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二。一五年五月 万方数据 中文摘要 f1的：本文选取白中幽南海及印度洋深海沉积物中分离鉴定的放线菌 为研究对象，通过高通量发酵及活性和化学筛选，发现代谢产物一卜富， 抑菌活性良好的目标菌株。结合不同模式的活性检测，对目标菌株进 行进一步发酵、提取、分离和纯化其次级代谢产物，利用NMR、MS 等现代波谱技术分析其分二r结构，阐明Ej标微生物的活性来源，为开 发和利用新的药用微生物资源提供理论依据。方法：①中科院海洋微 生物研究中心微生物库选取的26株放线菌进行高通量发酵，以薄层 色谱法(TLC)和高效液棚色谱法(HPLC)确定次级代谢产物丰富 的菌株；以抑菌试验为活性导向初步筛选_}{{有活性的菌株；②将筛选 出的Ej标菌株进行发酵，将粗浸膏依次以常雎柱层析(正相硅胶、反 相RD一18硅胶)、中压制备色谱(MPLC)以及制备型高效液相色谱 法(HPLC)分离纯化；③用MS、NMR等现代光谱学方法鉴定单体化 合物的结构；④测定甲．体化合物的抑菌活性、1，1一二I苯基苦基苯肼 (DPPH．)自由基清除活性和血管紧张素转化酶抑制活性。结果：菌株 01299 的生物活性筛选发现放线菌Pseudonocardiasp．SCSIOZ日、匕P产-生 丰富且有活性的次级代谢产物，将其确定为目标菌株，进行次级代谢 产物的分离纯化和结构鉴定，共分离鉴定13个化合物，其中五个环 ：一肽类：环(￡一脯一三．酪)二肽(1)、环(三一脯一￡一缬)二肽(2)、环(￡一 脯．三一苯丙)二肽(3)、环(三一缬一￡一苯丙)二肽(4)、环(￡一脯·￡一亮)二 万方数据 _r_二甲酸二乙二醇酯(7)；三个酸类：十四碳烷酸(+豆蔻酸)(8)、 4一羟基．3一甲氧基苯甲酸(香草酸)(9)、3，5．二甲氧基一4．羟基苯甲 酸(丁香酸)(10)；一个醇类：吐叶醇(11)和两个苯并恶唑啉酮 类：6．羟基．2．苯并恶唑啉酮(12)、2一苯并恶唑啉酮(13)。化合物 l～10的活性测试表明，化合物3和5具有1，1一_：苯基苦基苯肼(DPPH·) 自由基清除活性，IC50值分别为：9．48umol‘mL。1和2．85 gmol‘mL_1； 化合物4具有血管紧张素转化酶抑制活性，IC50值为0．72 gmol·mL～； 化合物6对金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌有抑制作用， 最小抑菌浓