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黄酮锌致畸作用的研究 高珉之 张雷 王明秋 赵博 王瑞翀 黑龙江省疾病控制中心 150036 电子邮箱：374549033@ 黄酮锌是黄酮（从黄芩中提取的黄芩甙）与锌形成的有机配合物，为棕黄色粉末状结晶。本产品为饲料级，可直接掺入饲料。适用于畜禽及水产等饲养动物。据企业介绍，该产品改善动物适口性，显著提高采食量，提高锌的利用率，并促进生长；改善畜禽肉质和风味；同时增强机体免疫机能，预防腹泻。该样品经过微核试验、精子畸形试验及Ames试验显示未见致突变作用，为进一步了解其食用的安全性，我们进行了致畸试验的研究。 关键词：黄酮锌，胚胎毒性，致畸作用 1. 材料和方法 1.1样品 黄酮锌（黄芩甙锌）橙黄色固体粉末。每吨配合饲料的推荐添加量为100-250g，实验中以250g/吨计算。 1.2 实验动物 清洁级Wistar大白鼠由吉林大学基础医学院动物实验中心提供，许可证号：SCXK（吉）2011-0004。 1.3动物实验室环境 屏障环境。许可证号：SYXK（黑）2011-014。饲料由北京科澳协力饲料有限公司提供，许可证号SCXK(京)2009-0012。 1.4剂量与分组 设3个剂量组和1个对照组，采用饲料掺入法进行试验。各剂量组配制方法如下：高、中、低剂量组分别取送检样品250g、125g、62.5g加入基础饲料至10kg，相当于样品推荐量的100倍、50倍、25倍。对照组只喂食基础饲料。 1.5实验方法 1.5.1“受孕动物”的检查和给受试物时间： 选用性成熟大鼠，雌、雄按2：1合笼后，每日早晨查阴栓，查出阴栓，认为该鼠已交配，当日作为“受孕”零天。如果5天内未交配，更换雄鼠。检出的“孕鼠”随机分到各组，并称重和编号，在受孕的第7～16天，每天采用饲料掺入法给予受试物。每天观察孕鼠中毒体征，有流产体征者（阴道出血）及时处死剖检，并记录母体受试过程中死亡情况。受孕的0、7、12、16、20天称量并记录孕鼠体重。 1.5.2 孕鼠处死和检查：于大鼠受孕第20天直接断头处死。剖腹取出称量窝重，记录并检查吸收胎、早死胎、晚死胎及活胎数。 1.5.3 活胎仔检查：逐一记录胎仔体重、身长、尾长，检查胎仔外观有无异常。 1.5.4 胎仔骨标本的制作与检查： 将每窝1/2的活胎仔（奇数或偶数）放入95％乙醇中固定2-3周，取出胎仔，流水冲洗数分钟后，放入1%氢氧化钾溶液内（至少5倍于胎仔体积）8～72小时后。放入茜素红-S应用液中染色6～48小时，每天轻摇1～2次，直至骨骼染成红色为止。再放入透明液A中1～2天，放入透明液B中2～3天，待骨骼染红而软组织基本褪色，将标本放入平皿中，在透射光源体视显微镜下作整体观察，然后逐步检查头骨、肋骨、胸骨、脊椎及四肢骨发育及畸形情况。 1.5.5胎仔内脏检查：每窝的1/2活胎仔放入Bouins液中固定2周，作内脏检查。先用自来水冲去固定液，将鼠仰放在蜡板上，剪去四肢和尾，用刀片在头部横切和纵切共5刀，观察脑、眼、鼻、舌等部位。然后自腹中线剪开胸、腹腔，依次检查心、肺、横膈膜、肝、胃、肠等脏器的大小、位置，查毕将其摘除，再检查肾脏、输尿管、膀胱、子宫或睾丸位置及发育情况。然后将肾脏切开，观察有无肾盂积水与扩大。 1.6统计处理 数据用STATA软件包进行方差检验统计。 结果 2.1对孕鼠的影响： 试验期间孕鼠活动正常，未见流产，整个试验期间孕鼠无死亡。 黄酮锌（黄芩甙锌）对孕鼠体重的影响(g，) 剂量 (g/kg饲料) 孕鼠数 不同妊娠天数动物体重 总增重 （只） 0天 7天 12天 16天 20天 对照组 13 263.6±17.0 285.8±19.6 309.8±21.7 331.5±29.2 363.1±37.2 99.5±29.2 6.25 13 263.0±9.6 284.0±9.4 319.5±26.9 330.1±17.9 356.5±20.8 93.5±15.1 12.5 12 270.4±16.3 293.4±15.2 320.06±17.7 341.0±18.8 369.7±27.7 99.3±18.6 25 13 266.4±13.6 294.3±12.6 317.8±13.0 343.0±18.8 379.1±27.3 112.8±20.1 试验期间各剂量组动物生长活动良好，体重和总增重与对照组相比，差异无统计学意义（P0.05）。 黄酮锌（黄芩甙锌）对子宫重量、胎仔数等的影响() 剂量 (g/kg饲料) 孕鼠数 （只） 平均窝重 (g) 窝平均活胎数 (只) 总活胎数(只) 吸收胎数(只) 死胎数(只) 对照组 13 62.98±25.37 11.1±4.5 145 1 0 6.25 13 56.48±19.39 9.1±3.3 118 3 0 12.5 12