植物果肉总RNA试剂盒说明书.docVIP

杭州新景生物试剂开发有限公司区 地址：浙江省杭州市西湖科技经济园金蓬街366号1幢东4F 邮编：310030 电话：0571 传真：0571 HYPERLINK 仅供科研使用，请勿用于人体及动物的治疗或临床诊断。 Ver.1 植物果肉总RNA试剂盒说明书 产品组成 植物果肉总RNA试剂盒 Cat. No. 5次样品 5102005 50次制备 5102050 过滤柱 核酸纯化柱 β-巯基乙醇 Buffer RLP Buffer WA Buffer WBR RNase-Free Water 说明书 5套 5套 50 μl 3 ml 1.9 ml 1.5 ml 1.5ml 1份 50套 50套 500 μl 30 ml 12 ml 9.5 ml 2 ml×3 1份 产品储存与有效期 试剂盒如果储存于室温（15~25℃），可在两年内保持使用性能无明显变化；如果将产品储存于2~8℃，可延长产品的有效期至两年以上。 技术支持 杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：e-mail: HYPERLINK mailto:technical@ technical@, 电话：400-0099-857。 产品介绍 本产品不涉及酚氯仿的使用，适合从500 mg含高糖分且多汁的植物组织中分离纯化总RNA。植物组织经裂解液溶解并释放RNA，补加乙醇后加入纯化柱，RNA结合在纯化柱上，溶解的蛋白与PCR抑制物则被过滤除去。RNA经两种洗液洗涤后，用RNase-Free Water洗脱，即可用于RT-PCR，Northern blot，Dot blot，mRNA分离等各种分子生物学实验。 用户需自备的试剂与物品 液氮、无水乙醇和70％乙醇。 RNase-free 1.5ml离心管 移液器及吸头（为避免RNA酶的污染，建议选用含有滤芯的RNase-free移液器吸头） 一次性手套及防护用品和纸巾 台式小量离心机（可配离心1.5ml离心管和2ml离心管的转子） 研钵、旋涡震荡器 无RNA酶使用的实验室 使用前准备 如果离心机有制冷功能，请将温度设置到25℃。 每1ml Buffer RLP中加入10μl β-巯基乙醇，混合均匀。加入β-巯基乙醇的Buffer RLC一个月内使用不影响实验结果。 根据试剂瓶标签上的指示在Buffer WA和Buffer WBR中加入无水乙醇，并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标记。 因为唾液、皮肤上均含有RNA酶，所以RNA的提取的全过程都需要戴乳胶手套和口罩。 操作步骤： 1. 在研钵中加入约2~5g植物组织和液氮，将组织研磨至粉末状，再用液氮预冷的1.5 ml 离心管称取450~500 mg研磨成粉末状的组织。 * 研磨组织时应及时补加液氮，避免组织融化，以免内源性的RNA酶恢复活性而降解RNA。 * 勿使用超过500 mg组织，否则可能导致过滤柱堵塞，并使纯化的RNA中混有基因组DNA污染。 * Buffer RLP具腐蚀性，请戴防护用品进行操作。 2. 加入500 μl 已加入β-巯基乙醇的Buffer RLP，旋涡振荡直至组织全部溶解。13000 rpm 离心2分钟。 3. 吸取≤700 μl步骤2中的离心上清并转移到过滤柱中，盖上管盖，13000 rpm 离心1分钟。 * 此步骤可除去大部分基因组DNA，请勿省略。 * 如果溶解物不能全部滤过过滤柱，说明组织中核酸含量过高。此时应吸取300 μl滤液转移到一个洁净的1.5 ml 离心管中，再加300 μl 70％乙醇到1.5 ml 离心管中并用吸头吸注6-8次混合均匀，然后将全部混合液加入到核酸纯化柱中，盖上管盖，13000 rpm 离心1分钟。过滤柱及残余的滤液则丢弃不用，然后直接进入步骤6的操作。 4．弃过滤柱，向滤液中加入700 μl 70％乙醇并直接用吸头吸注6~8次混合均匀，吸取700 μl混合液加入到核酸纯化柱中，盖上管盖，13000 rpm 离心1分钟。 * 加入70％乙醇混合后如果有沉淀产生，请将沉淀一起加入到核酸纯化柱中。 5. 弃2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml 离心管中，吸取剩余的混合液加入到核酸纯化柱中，13000 rpm 离心1分钟。 * 滤液无须彻底弃尽，如果要避免粘附在离心管管口的滤液对离心机的污染，可将2ml 离心管在纸巾上倒扣拍击一次。 6. 弃2ml 离心管中的滤液，在核酸纯化柱中加入500 μ