巢式MSP法检测恶性血液病细胞株p16基因启动子甲基化状态的研究.docxVIP

巢式MSP法检测恶性血液病细胞株pl6基 因启动子甲基化状态的研究 :周华蓉，沈建箴，付海英，叶宝国，范丽萍，林福安 【摘要】 本研究应用改进的甲基化特杲性PCR (MSP)法，即 巢式甲基化特异性PCR法检测6种肿瘤细胞株pl6基因启动子的甲 基化状态效率，探讨其在筛选pl6基因启动子高甲基化的肿瘤细胞 株，及将其作为研究基因甲基化与表达关系的理想细胞模型中的应 用。6种肿瘤细胞株基因组DNA经碱变性后以亚硫酸盐修饰，再用 巢式甲基化特异性聚合酶链反应扩增，分析检测其pl6启动子区 CpG岛的甲基化状态。结果表明：CA46、U266都有不同程度的 pl6基因启动子区甲基化，而Molt4 K562、HL-60 Jurkat的pl6 基因启动子区均未甲基化。结论：用巢式甲基化特异性PCR可以 准确的检测岀恶性血液病细胞株pl6基因的甲基化状态，方法简 单，灵敏且重复性强，可以广泛用于筛选各种pl6基因启动子区甲 基化的恶性血液病细胞株以及恶性血液病诊断。 【关键词】 巢式甲基化特异性聚合酶链反应 Detection of Promoter Methylation of pl6 Gene in Hematological Malignant Cell Lines by Nested Methylation Specific Polymerase Chain Reaction Abstract This study ed to investigate the effeciency of modified methylation-specific polymerase chain reaction i.e.nested methylationspecific polymrase chain reaction , used to detect the promoter methylation of pl6 gene in six hematological malignant cell lines, and to explore the application in selection of hematological malignant cell lines oter hypermethylation, and make them to be an idel cell models for studying the relationship betethylation and expression. DNAs odification and a nested-MSP plify the promoter region, nested MSP product of pl6 gene promoter ethylation of pl6 gene ethylated? In conclusion, pl6 gene methylation in hematological malignant cell lines can be perfectly detected by nested?MSP method , pie, sensitive and specific for screening all kinds of hematological malignant cell lines ethylated? Key ethylation specific polymerase chain reaction; hematological malignant cell line; pl6 gene; gene methylation 目前分析DNA甲基化最常用的方法是甲基化特异性PCR (MSP),在此基础上产生改进的巢式甲基化特异性PCR (nMSP) 具有更高的灵敏度和特异性，逐渐被应用于甲基化启动子的分析和 检测中，MSP法可以检测出1/1000的甲基化等位基因片段，而 nMSP法灵敏度又是MSP法的50倍，因此可以检测出1/50 000的 甲基化等位基因片段［1］,适合用于筛选pl6基因启动子区甲基化 的肿瘤细胞株。本研究主要探索应用巢式MSP检测6种恶性血液病 细胞株pl6基因启动子区甲基化状态，从而筛选出可以用于甲基化 与表达之间关系研究的理想细胞模型。 材料和方法 材料 细胞系 所用7株肿瘤细胞株为本所冻存的细胞株，分别是Molt4、HL- 60、K562、Jurkat 淋巴瘤、CA46、Hep-G2 U266。 主耍试剂 RPMI 1640培养液购自Gibco公司，胎牛血清为杭州四季青产 品，蛋白酶K为Amerco公司产品，Taq酶为TaKaRa公司生产。 DNA纯化试剂盒(I 1640培养液中，3丁C、5% CO2、饱和