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R + *L R*L 受体与配基的结合反应 非竞争性的结合反应 核素标记配基 分析受体的数量和性质 原理 根据R*L的放射性和*L的比活度推算受体数量 利用Scatchard作图法求出受体的亲和力常数，反映受体的性质。 通过测定类似物或阻断剂竞争受体的能力可测定其特性。 饱和曲线 Scatchard作图 [RT] [RT] KD 1 KD 离体RBA基本方法 制备标本(亚细胞组分、细胞悬液、冰冻切片） 加样（放射配基、缓冲液、标本、非标记配基） 孵育（反应达平衡） 分离结合和游离的放射配基 测量结合部分的放射性 数据处理或观察切片上的受体分布 放射配基的要求 高比活度：受体数量低 高亲和力：易达饱和、易分离 高特异性：减少交叉反应 高放射化学纯度：参数计算依据配基用量和 比活度，大于95% 结合与游离部分分离 低温和快速分离。过滤、离心、透析、电泳等 常用过滤法:玻璃纤维滤膜 总结 反应类型 结合类型 标记物 待测物 RIA 免疫反应 竞争结合 抗原 抗原 IRMA 免疫反应 非竞争 抗体 抗原 RBA 受体配体 非竞争 配基 受体 数量和性质 非放射性标记免疫分析 提高灵敏度 减少放射性废物 原理相同 探测信号不同 探测仪器不同 一、酶标记免疫分析 (enzyme immunoassay, EIA) EIA和 IEMA（酶免疫分析法）的测定原理与RIA和IRMA相同，竞争结合和非竞争结合。 IEMA应用最多-酶联免疫吸附分析(ELISA)。 只是用酶替代标记抗原或抗体的放射性核素 常用的酶辣根过氧化酶(HRP),底物四甲基联苯胺(TMB) 分光光度计检测 二、化学发光免疫分析 化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay CLIA） 标记物为能产生化学发光的化合物，如异鲁米娜、甲基氮蒽。碱性条件下遇过氧化物有单光子发射。缺点:发光时间短。 化学发光酶免疫分析(ECLEA) 标记物碱性磷酸酶，底物金刚烷。可靠性高。 电化学发光免疫分析(ECLIA) 电解反应与化学发光结合。标记物三丙胺，底物三价钌化合物。可循环利用、发光时间长、强度高易测定等。 二、荧光标记免疫分析 以荧光物质标记抗体，与相应抗原结合后，在荧光酶检测仪中测定其强度，从而进行抗原（或抗体）定位及其分布或测定体液或标本中抗原的含量。 分类 传统荧光免疫分析FIA 时间分辨荧光免疫分析(TrFIA) 标记物为镧系元素，常用铕(Eu)。经紫外光激发后发出荧光。灵敏度高，可重复测定；增强剂有毒性。 非同位素免疫分析 优点： 无放射污染 自动化 试剂货架时间长 缺点： 价格贵 仪器不易质控 谢谢！ 体外分析技术 核医学科 体外分析技术 利用放射分析或非放射分析技术测定生物样品中微量生物活性物质含量的一类分析法。 体外放射分析技术 放射性竞争结合分析:放射免疫分析（RIA) 放射性非竞争结合分析:免疫放射分析（IRMA) 受体放射配基结合分析(RBA) 体外非放射分析技术 化学发光分析 时间分辨荧光分析 酶免疫分析 放射免疫分析（Radioimmunoassay,RIA） 概念 是利用特异抗体与标记抗原和非标记抗原的竞争结合反应，通过测定复合物放射性来计算非标记抗原的量的一种超微量分析技术。 1959年Berson和Yalow 首先报导人体血浆内源性胰岛素的免疫分析。 1977年荣获诺贝尔奖。 原 理 基本原理是竞争结合反应 *Ag+Ab *AgAb+*Ag (free) + Ag