高通量测序技术解析五粮液窖泥原核微生物群落结构！-食品与发酵工业.PDFVIP

DOI：10．13995／j．cnki．11—1802／ts。014156 高通量测序技术解析五粮液窖泥原核微生物群落结构 赵东，郑佳8，彭志云，吕学兰，杨康卓，张建敏 (宜宾五粮液股份有限公司技术研究中心，四川宜宾，644000) 摘 要 为清晰认识五粮液特殊窖泥微生态群落结构及功能，利用lllumina NextSeq500高通量深度测序平台首 rDNA 次分析了五粮液不同窖泥原核微生物群落16S V4高变区序列；优化了QIIME程序并整理和统计样品序列 数目和操作分类单元(OTUs)的数量，分析了不同窖泥中原核微生物群落的丰度、多样性；利用系统发育分析确 555 定了优势菌群的系统发育地位。该研究结果表明，从五粮液窖泥中共获得7 164条高质量目标片段。在相 同的测序深度条件下(300 000条)，五粮液窖泥原核微生物主要由细菌和古菌构成，共检出22个门，52个纲，89 生物群落，尤其是群系复杂的厚壁菌门细菌，较高丰度的产己酸菌群和促进己酸生成的甲烷菌群。 关键词 五粮液；窖泥；原核微生物群落；高通量测序 五粮液，古称“重碧春、姚子雪曲、杂粮酒等”，是 赵东等¨。分析了五粮液糟醅发酵过程中细菌(好氧、 我国传统固态发酵白酒的典型代表。其独特的“五 兼性厌氧)、酵母和霉菌的变化趋势。然而，传统培 粮配方、包包凸制曲工艺、双轮底发酵、分层起糟、分 养法中由于培养基的高度选择性、微生物的独特生长 层蒸酒、量质摘酒”等优秀的传统酿造技艺极大程度 特性等，迄今为止仅有微生物总数的0．1％～10％被 促进了我国白酒酿酒工业发展。五粮配方的续糟发 检出¨。，且此法操作过程费时费力，容易因培养基选 酵是五粮液糟醅发酵的根本特征，长期不间断连续生 择性、操作者的误差以及菌株生长条件需求差异等因 产，尤其是糟醅的双轮底发酵，极大程度上提高了窖 素掩盖真实信息，难以定量表征群落多样性特征及胁 池内窖泥与糟醅的厌氧接触时间，糟醅与窖泥间营养 迫条件的影响。进入21世纪，聚合酶链式反应 物质、微生物的交换，形成了“以窖养糟、以糟促窖、 (PCR)技术开始应用于浓香型白酒微生物群落结构 糟窖互养”的良好互动局面。因此，确定窖泥微生物 的研究H“。，一定程度上克服了传统分离培养技术的 尤其是原核微生物的结构特征将有助于科学认识五 粮液的酿酒微生物菌群代谢特征，为发酵过程代谢调 辨率(仅仅检出少数优势种群)、条带共迁移、条带 控提供必要的依据。 DNA／RNA回收困难、无法定量确定条带比例等缺 窖池微生物群落的研究技术主要包括了传统分 点，难以客观真实地定量反映窖泥微生物群落的演替 离培养技术、生物标记法和现代分子生物学免培养技 术。20世纪90年代以来，吴衍庸等…基于传统分离角甾醇∽1等已应用于研究浓香型白酒微生物群落生 培养技术剖析了五粮液老窖泥中厌氧微生物的群落 物量的分布规律，但由于菌株间具有相似的PLFA组 结构，结果表明己酸菌和厌氧异养菌等随窖龄而增 成等因素，菌株问PLFA相互干扰致使该法无法获得 加，己酸菌、甲烷菌等随窖池上、中、下位置顺序递增。 酿酒体系中微生物群落的组成信息。高通量测序技 术是近年来快速发展并渗透至多学科的有效的分子 第一作者：教授级高工，硕士生导师，中国酿酒大师(郑佳研究 生态学手段，无需分离纯培养单一菌株，提取体系基 员为通讯作者，E—mai