黑曲霉ATCC1015催化16α17α–环氧黄体酮11α-天津科技大学学报.PDFVIP

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2019-03-29 发布于天津
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黑曲霉ATCC1015催化16α17α–环氧黄体酮11α-天津科技大学学报.PDF

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第 32 卷第 6 期天津科技大学学报 Vol. 32 No. 6 2017 年 12 月 Journal of Tianjin University of Science Technology Dec. 2017 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510 黑曲霉 ATCC1015 催化 16α ，17α–环氧黄体酮 11α–羟基化及相关 P450 基因诱导表达 1 1 2 1 林本凤，职亚飞，刘晓光，路福平 (1. 天津科技大学生物工程学院，天津 300457 ；2. 天津科技大学化工与材料学院，天津 300457) 摘要：为了定向遗传改造黑曲霉菌种，研究了黑曲霉 (Aspergillus niger )ATCC1015 转化甾体 16α ，17α–环氧黄体酮活性．转化产物经过薄析 (TLC)、高效液相色谱(HPLC) 以及氢谱、碳谱分析最终确定为 11α–羟基–16α ，17α–环氧黄体酮．确定了黑曲霉 ATCC1015 11α–羟基化活性受底物 16α ，17α–环氧黄体酮的诱导．鉴于真菌的甾体羟化酶属于细胞色素 P450 酶，从黑曲霉 ATCC1015 的 P450 (CYP)基因数据库中筛选出 57 个具有编码甾体羟化酶潜力的 CYP 基因；利用实时荧光定量 PCR 确定了 2 个受甾体底物高度诱导的候选目标甾体羟化酶基因 AnA100 和 AnA154．分别构建了 AnA100 基因和 AnA154 基因的重组酿酒酵母菌株 pYES2-AnA100 和 pYES2-AnA154 ，甾体转化结果显示重组酵母菌 pYES2-An100 能够转化 16α ，17α–环氧黄体酮生成 11α–羟基–16α ，17α–环氧黄体酮．关键词：黑曲霉ATCC1015 ；11α–羟基化；16α ，17α–环氧黄体酮；实时荧光定量 PCR 中图分类号：Q781 文献标志码：A 文章编号：1672-6510 (2017)06-0008-07 11α-Hydroxylation of 16α ，17α-Epoxy Progesterone by Aspergillus niger ATCC1015 and Induction Expression of Relevant Cytochromes P450 Genes 1 1 2 1 LIN Benfeng ，ZHI Yafei ，LIU Xiaoguang ，LU Fuping (1．College