响应面试验设计优化脂肪酶发酵培养基-北京化工大学学报.PDFVIP

第 33 卷 第 2 期 北 京 化 工 大 学 学 报 Vol. 33 , No. 2 2006 年 JOURNAL OF BEIJ IN G UN IV ERSIT Y OF CHEMICAL TECHNOLO GY 2006 响应面试验设计优化脂肪酶发酵培养基 张大皓 　谭天伟 　王炳武 (北京化工大学生命科学与技术学院 ,北京 　100029) ( ) 摘 　要 : 采用响应面试验设计方法对卡门柏青霉 Penicillium camembertii Thom PG3 发酵生产脂肪酶的培养基进 行优化 。用部分因子分析法研究原始发酵培养基各成分对响应值的影响程度 ,发现脱脂豆粕和磷酸氢二铵的质量 浓度对脂肪酶活性的影响显著 。利用最陡爬坡法逼近最大响应区域 。用中心组合设计确定脱脂豆粕和磷酸氢二 铵的最优质量浓度 。实验结果经过回归分析拟合出一个二次方程的数学模型 。并且用实验所得的最优培养基进 行发酵试验得到的响应值基本符合数学模型 。酶活性比优化前提高了43 % 。 关键词 : 响应面 ; 脂肪酶 ; 青霉 中图分类号 : TQ9256 　　脂肪酶是一类分解和合成脂肪的酶[12 ] 。脂肪 是很广泛[1011 ] ,特别是在青霉脂肪酶的发酵方面还 酶不仅可以催化酯水解反应还可 以催化酯合成反 没有见到报道 。 应[3 ]和转酯反应[4 ] 。卡 门柏青霉脂肪酶有其它许 多微生物脂肪酶不具备的优点[5 ] 。耐高温 ,最佳反 1 　实验部分 应温度为 48 ℃。对甘油三酯有 1 ,3 位的专一性 。 11 　脂肪酶发酵及酶活性测定 有特殊的底物专一性 ,这些是扩展青霉[6 ] 和圆弧青 ( 111 　菌种 　卡门柏青霉 Penicillium camembertii 霉[7 ]脂肪酶不具备的性质 。因此卡 门柏青霉脂肪 Thom) 为实验室保存菌种 酶有很高的应用价值和研究意义 。 112 　培养基斜面种子培养基 ———麦芽汁培养基 青霉的生长和脂肪酶合成受到培养基中各种成 　麦芽汁 50 mL ,水 50 mL ,琼脂 2 5 g 。加热沸煮 30 分的影响如碳源 、氮源 、无机盐等 。谭天伟[5 ] 等对 min ,使之完全溶解 ,倒斜面灭菌备用 。摇瓶种子培 ( ) 卡门柏青霉产脂肪酶培养基组分的选择进行了优 养基 质 量 浓 度 kg/ L 脱 脂 豆 粕 004 , 硫 酸 铵 ( ) 化 。确 定培养基 的质量浓度 kg/ L : 脱脂豆粕 0001 ,磷酸氢二钾 0005 。摇瓶中发酵培养基质量 ( ) 004 ,霍霍巴油 0005 ,磷酸氢二铵 0001 ,磷酸氢二 浓度 kg/ L 脱脂豆粕 004 ,霍霍巴油 0005 ,磷酸 钾 0005 ,吐温 60 0005 。本文以此为基础进行培 氢二铵 0001 ,磷酸氢二钾 0005 。