化脓性链球菌脂蛋白FtsB的基因克隆表达纯化与功能研究.PDFVIP

微生物学通报 DEC 20, 2011, 38(12): 1786−1792 Microbiology China © 2011 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 化脓性链球菌脂蛋白 FtsB 的基因克隆、 表达、纯化与功能研究 Δ Δ * 李慧 吕洁 王红翠 王南杰 李楠 詹胜 阳小燕 孙雪松 (暨南大学 生命与健康工程研究院 广东 广州 510632) 摘 要: 体外克隆化脓性链球菌5005 的ftsb 基因, 表达并纯化FtsB 蛋白, 并对其铁色素结合特性 进行初步研究。首先通过PCR 方法从基因组中扩增ftsb 基因, 将其连接到pGEX4T-1 载体上, 转 入大肠杆菌 DH5α 中大量扩增, 将测序正确的重组载体转化到表达宿主大肠杆菌 BL21 进行表达, 优化诱导表达条件。利用亲和层析方法纯化表达产物, 并对FtsB 的铁色素结合特性进行研究, 同 时通过DEPC 封闭组氨酸实验对其结合位点进行初步研究。成功构建原核表达载体pGEX-ftsb , 获 得分子量约33 kD 的野生型FtsB 蛋白, 产率为30 mg/L 。紫外-可见光谱研究表明FtsB 和铁色素 结合后在450 nm 处出现紫外吸收峰, DEPC 封闭组氨酸实验证明FtsB 中组氨酸不参与铁色素的结 合。对FtsB 蛋白进行铁色素结合特性和结合位点进行研究, 为进一步研究细菌中的铁色素转运机 理及开发疫苗候选物和药靶奠定一定的理论基础。 关键词: 化脓性链球菌, FtsB 蛋白, 铁色素, DEPC Cloning, expression, purification and functional study of lipoprotein FtsB from Streptococcus pyogenes LI HuiΔ LÜ JieΔ WANG Hong-Cui WANG Nan-Jie LI Nan ZHAN Sheng YANG Xiao-Yan SUN Xue-Song* (Institute of Life and Health Engineering , Jinan University, Guangzhou, Guangdong 510632, China) Abstract: This study aims to clone ftsb gene from Streptococcus pyogenes 5005, to express and purify FtsB, and to characterize its ferrichrome binding properties in vitro. DNA fragments encodingftsb was obtained by PCR and inserted into plasmid pGEX4T-1, followed by transformation into Escherichia coli DH5α. The constructed recombinant plasmid was transformed into Esc