2.6 植物基因工程教材编辑.pptVIP

（3）翻译水平的鉴定 为检测外源基因转录形成的mRNA能否翻译，还必须进行翻译或者蛋白质水平检测。 主要方法：Western杂交 三 转基因作物的生物安全性 第六节 高等植物基因工程 一、植物基因工程发展概况 自从1983年第一株转基因烟草问世以来，至今已有120种植物转基因获得成功。1996年全球大面积种植，并不断扩大。 世界银行下属机构预测，世界范围内转基因作物产业的交易额： 2005年达到60亿美元； 2010年达到200亿美元。 种植国家： 先后有30多个国家批准了3000多例田间试验，涉及的植物种类有40多种； 2000年有13个国家种植商品化转基因植物； 2004年有17个国家种植商品化转基因植物。 美国（59%），阿根廷（20%），加拿大（6%） 中国（5%），欧洲很少 2004年3月英国批准大面积种植转基因植物，但要求非常严格。 2005年德国通过法案，严格限制（包括实验室研究）。 转基因作物种类： 主要为大豆、玉米、棉花和油菜等，以转基因大豆面积最大。 目标性状： 抗除草剂： 2000年使用抗除草剂大豆、玉米和棉花占转基因作物74%。 抗虫和抗病毒病：2000年，Bt玉米、 Bt棉花占19%。 抗除草剂+抗虫性双价的转基因棉花和玉米占7%。 美国三大转基因作物历年种植面积 我国转基因作物研究与利用概况 我国是世界上第一个商品化种植转基因作物的国家。自行培育的双价转基因烟草的抗病虫性达到60％，产量比对照增加15％，产值增加20％，1992年每亩增收200元，遗憾的是由于市场的原因现已不推广。 到1999年我国已批准中试的转基因作物有48项：包括水稻、小麦、玉米、番茄、白菜、番木瓜、甜瓜、花生、棉花、烟草、广藿香等11种作物； 主要目标性状是抗虫、抗病、耐盐、抗冻、耐储藏和抗衰老等。 已批准环境释放的有49个品种，涉及水稻、玉米、大豆、马铃薯、番茄、甜椒、线辣椒、棉花、杨树、烟草等10种作物。 经全国基因工程安全委员会批准商品化生产的作物已有： 我国自行研制开发的抗虫转基因棉花（转Bt及Bt+CpTI双价抗虫棉）； 2004年种植转基因棉花370万公顷，占棉花种植面积的50% 美国Monsanto公司开发的Bt抗虫棉； 延迟成熟期的转基因番茄； 抗黄瓜花叶病毒(CMV)转基因番茄； 抗CMV转基因甜椒。 由中国农科院生物工程中心开发的Bt棉对棉铃虫有显著的抗性。与对照相比减少农药用量80％，并减少用工150个/公顷，以上两者可使每公顷节省1500元，Bt转基因棉种深受棉农的欢迎。 二、高等植物的基因转化系统 概括起来主要有两类： 第一类是以载体为媒介的遗传转化，也称为间接转移系统。 第二类是外源目的DNA的直接转化。 Ti 质粒介导的转化系统 植物细胞的直接转化系统 转化子的筛选和鉴定 Ti 质粒介导的转化系统 Tumor induced by A. tumefaciens Agrobacterium tumefaciencs: used extensively for genetic engineering of plants. Ti质粒 Tumor inducing plasmid (bacterial plasmid) T-DNA (Transferred-DNA), 可以转移进入植物基因组. Ti 质粒的图谱 整个质粒 160 - 240 kb 其中 T-DNA 12 - 24 kb tms 的编码产物负责： 合成吲哚乙酸 tmr 的编码产物负责： 合成植物分裂素 tmt 的编码产物负责： 合成氨基酸衍生物 冠瘿碱 Ti 质粒致瘤的分子机制 损伤的植物根部会分泌出乙酰丁香酸和羟基乙酰丁香酸，它们能诱导Ti质粒上的vir基因以及农杆菌染色体上的一个操纵子表达。vir基因产物将Ti质粒上的T-DNA单链切下，而农杆菌染色体上的操纵子表达产物则与单链T-DNA结合形成复合物，后者转化植物细胞。 T-DNA的染色体整合机制 Ti 质粒的改造 除去T-DNA上的生长素（tms）和分裂素（tmr）生物合成基因，因为大量的生长素和分裂素会抑止细胞再生长为整株植物； 除去T-DNA上的有机碱生物合成基因（tmt）；因为有机碱的合成大量消耗精氨酸和谷氨酸，影响植物细胞的生长； 安装大肠杆菌复制子，使其能在大肠杆菌中复制，以利于克隆操作； 安装植物细胞的筛选标记，如 neor 基因，使用植物基因的启动子和polyA化信号序列； 安装多聚人工接头以利于外源基因的克隆。 除去 Ti 质粒上的其它非必需序列，最大限度地缩短载体的长度； 二元整合转