间接免疫荧光染色检测石蜡切片中的鸭病毒性肠炎病毒和抗原定位.pdfVIP

　中 国 兽 医 学 报 　2008 年 8 月 　第 28 卷 　第 8 期 　Chi n J Vet S ci 　Aug . 2008 　Vol . 28 　No . 8 　 871 间接免疫荧光染色检测石蜡切片中的鸭病毒性肠炎病毒和抗原定位 1 ,2 1 ,3 1 ,2 1 ,2 1 ,2 1 ,2 1 ,2 ( 程安春 ,韩晓英 ,朱德康 ,汪铭书 ,袁桂萍 ,廖永洪 ,徐 　超 　 1. 四川农业大学 动物医学 院禽病防治研究中心 ,四川 雅安 6250 14 ;2 . 动物疫病与人类健康四川省重点实验室 , 四川 雅安 6250 14 ;3 . 四川农 业大学 郫县水产学院 ,四川 郫县 6 11700) ( ) 摘要 :差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化鸭病毒性肠炎病毒 D EV 免疫兔制备兔抗 D EV 高免血清后 ,用 D EA E ( ) Sep hadexA50 柱层析纯化的兔抗 D EV Ig G 建立了间接免疫荧光染色法 IFA 检测石蜡切片中D EV 的方法 。IFA 的最佳条件为 :石蜡切片用 10 mmol/ L p H6 . 0 的柠檬酸缓冲液为微波修复液微波修复 10 min ,胰酶修复 20 min ; 10 %小牛血清室温封闭30 min ;加入 1 ∶25 的兔抗 D EV Ig G 于 4 ℃孵育过夜 ;再加入 F ITC 标记的羊抗兔 Ig G 于 37 ℃孵育 45 min 。以建立的 IFA 对 D EV 人工皮下感染死亡鸭的各组织器官进行检测 ,在死亡鸭的脾脏 、胸腺 、法 氏囊 、肝脏 、食道 、十二指肠 、直肠及肺脏中检测到 D EV 抗原 。研究表明 , IFA 检测石蜡切片中的 D EV 具有直观 、 特异性强的优点 ,是对 D EV 进行检测和抗原定位的良好方法 。 关键词 :间接免疫荧光 ;石蜡切片 ;鸭病毒性肠炎病毒 ;检测 ;抗原定位 中图分类号 :S852 . 65 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :(2008) 08087 105 Appl ication of indirect immunofl uorescent staining method f or detection and an tigen location of duck enteritis virus in paraff in sections C H EN G A nchun1 ,2 , HAN Xiaoyin g1 ,ZHU DeKang1 ,2 ,WAN G Mingshu1 ,2 , YU AN Guiping1 ,2 ,L I 1 1 ,2 ( A O Yonghon g ,XU Chao 　 1. A v i an D is eas e R esea rch Center , Col leg e of Vete ri n a ry M e d ici ne , S ich uan A