基于生理特性解析的2酮基L古龙酸发酵工艺研究-发酵工程专业论文.docxVIP

→一一一一-， 唰唰aE川 唰唰aE 川刷川曲 。 阳肌ku m恻川m川 AE· 唰州州EJW 川川川川00 肌 川川WA-- 阳Y 摘要 本论文以胞外大量积累》酣基 -L.古龙酸。-KLG) 的维生素C 生产菌株普通生酣古 龙酸菌 (Ketogulonicigenium vulgaer) WSH-OOl 和巨大芽抱杆菌 (Bacillus megaterium) WSH-002 组成的混酣体系为研究对象，以提高 2也G 生产效率为目标，研究了高渗条 件下混合菌系细胞生长和代谢特征，氨基酸对 2-KLG 生产的作用以及关键氨基酸种类 的确定，提出用廉价明胶代替 L甘氨酸和 L脯氨酸作用的策略，并进行 1 m3搅拌罐和 200m3 气升发酵罐放大实验，成功地实现了维生索 C 生产效率的提升。主要研究结果如 下t (1)在详细考察了2-KLG工业化生产过程中渗透压变化规律的基础上，研究了高惨 对混合菌系细胞生长和 2-KLG合成的影响，提出煎糖促进伴生菌巨大芽胞杆菌生长，进 而促进普通生嗣古龙酸葡生长和产酸的策略。结果表明， 2也G的积累和碱性物质 (Na2C03) 的流加使渗透压上升了 832 mOsmol/kg; 商渗抑制了巨大芽胞杆菌的生长 (15.4%)，从而抑制普通生嗣古龙酸菌 (31.7%) 的生长，导致2-KLG产量和生产强度分 别下降67.5%和69.3% (以1 250 mOsmol/kg为例);庶糖的添加则显著促进巨大芽胞杆菌 的生长，使高惨条件下(摇瓶， 1 250 mOsmol/kg) 2-KLG产量 (40.6 g/L)提高 87%; 在3 L发酵罐中，补加 10 mmol/L煎糖使2-KLG 发酵周期缩短 10.8%，2-KLG 生产强度提高 10.4%。 (2) 利用蛋白质组学、基因组学技术并结合不同批次玉米浆 (CSL) 对 2-KLG 生产 的影响，确定了影响 2-KLG 生产的关键氨基酸种类。结果表明，巨大芽抱杆菌裂解液 使普通生酬古龙酸菌 L丝氨酸、L-苏氨酸、 L色氨酸、 L-甲硫氨酸、 L异亮氨酸、 L-缴 氨酸、 L苯丙氨酸以及 L谷氮酌胶合成途径中相关的蛋白(酶)表达上调:普通生酣古 龙酸菌 L-组氨酸、 L甘氨酸、 L-赖氨酸、 L-苏氨酸、 L甲硫氨酸、 L-亮氨酸和 L异亮氨 酸从头合成途径不完全:在摇瓶分批发酵添加关键氨基酸 L甘氨酸、 b脯氨酸和 L苏 氨酸时，发酵周期分别缩短至 58 h(缩短 17.l%)， 62h(缩短 11.4%) 和 60h(缩短 16.7%)， 2-KLG 生产强度分别达1.12土0.02 g/L/h (提高20.4%)， 1.04士0.01 g/L/h (提高 11.8%)和 1.09士0.02 g/L/h(提高 17.2%)。 (3)详细分析了明胶的组成成分，提白用廉价明胶代替 L甘氨酸和L脯氨酸作用的 策略，并将实验结果在 1 m3和200 m3发酵罐上进行放大。结果表明，明胶中对 2矶。发 酵有显著促进作用的关键氨基酸 -L.甘氨酸和L脯氨酸在明胶中的质量分数占 34.21%; 在1 旷搅拌罐上用明胶代替L甘氨酸和L脯氨酸的作用时， 2-KLG发酵周期缩短至43 h (缩短15.6%)，2-KLG产酸速率提闹到1.89 g/L/h (增加25.2%); 在200 旷气升发酵罐上进 行明胶生产试脸，发酵周期缩短至 55 h (缩短8%)，2-KLG产量达到 102.28 g/L， 2巫山 产酸速率提高到1.86 g/L/h (增加9.3%)。 11 11 摘架 关键词: 2-酣基-L-古龙酸，高惨，关键氨基酸，明股，工业化放大 Abstract Abstract This thesis aimedω 如rther enhance 和keto心gulonic acid (2KLG) production efficiency using the m.ixed culture of Ketogulonicigenium vulgaer and Bacil/us megaterium. For 也is，由.e cell grow由 and metabolic characteristics of 伽e mixed 耐ains under 甜甜erent environmental (hyperosmotic 耐ess) and nutritional (由e addition of amino aci也)∞，nditions were ωefully investigated，and 世10se optimum fermentation p阴阳 parameters were industrial de