分子肿瘤概论(研究生课件)-11-19,26两次课程实例.pptVIP

uPA与u-PAR还能激活信号传导系统， C．PAI （PA 抑制剂） PAI1 是u-PA 的主要抑制剂 PAI2 不同肿瘤表达意义不一 PAI3 功能不清 ②基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMP） 需钙、锌离子作辅助因子 MMP 分类 胶原酶：如间质胶原酶 （Collagenase） 明胶酶：如明胶酶A (gelatinase A) 间质溶素：如间质溶素1 、2 膜型基质金属蛋白酶：Ⅰ、Ⅱ型 可分别降解ECM中各种不同成分 ECM降解的主要蛋白水解酶类 金属蛋白酶抑制物 TIMP-1 ，TIMP-2 浸润与否取决于MMP与TIMP的对比 ③胱氨酸蛋白酶类 Cathepsin B 作用 降解ECM中各种胶原、LM、 FN、黏蛋白 激活间质胶原酶和IV型胶原酶 ④天（门）冬氨酸蛋白酶 包括组织蛋白酶D,E ( cathepsin D, E ) CD ： 在肿瘤浸润转移中的作用 CD 表达的调节 不同组织调节因素不完全一致 CE 在肿瘤 6.瘤细胞以主动方式入循环管道并形成栓子 微小淋巴管、微小静脉壁 缝隙 瘤细胞存在形式 单个 成团 同类癌栓 异类癌栓 黏附分子对其发挥调节作用 7.在特定器官的毛细血管滞留并黏着，再次穿过血管壁并定居、增殖 器关特异性（选择性）机制 (1) 黏附分子的作用 (2) 化学趋化因子 (3) 微环境不适合 (4) 与免疫状态有关 （二）机体免疫状态与肿瘤浸润转移 参与控制转移的免疫细胞主要有 NK 细胞 巨噬细胞 T 淋巴细胞 （三）肿瘤浸润转移相关基因 转移相关基因 （四）肿瘤表观遗传改变与肿瘤浸润转移 表观遗传学(Epigenetics) ---与遗传学(genetic)相对应的概念 ---表型状态改变，基因型不改变 ---没有DNA序列变化的情况下， 可遗传的基因表达改变，导致的基因产物的变化。 DNA的“后天性”修饰（如甲基化修饰）、组蛋白的各种修饰等 （五）肿瘤干细胞(tumor stem cell, TSC) 2001年由Reya等提出 2006年美国癌症研究协会（AACR）定义 存在于肿瘤组织中具有无限自我更新能力并能产生不同分化程度的肿瘤细胞的细胞 特征 (1) 无限增殖和多向分化 (2)存在自我更新的信号传导途径 (3)具不同表型，异质性，对放化疗不敏感 (4)具有端粒酶活性 (5)能转移到各种不同的组织 （六）肿瘤微环境与肿瘤浸润转移 肿瘤细胞 间质细胞 细胞外基质 间质细胞所分泌的活性介质（细胞因子） 共同构成的局部内环境 微环境改变 肿瘤细胞 ---自分泌和旁分泌 全身和局部组织 ---代谢、分泌、免疫 结果： 限制或促进肿瘤的发生和发展 三.肿瘤学研究中常用的分子生物学基本技术及其应用 (一)基因扩增的检测 1.过量的蛋白表达 ---免疫组化（荧光）定位 ---ELISA和Western blot 定量 抗原 抗体 标记 标记 抗原 标记 标记 抗原 标记 标记 抗原 标记 2.基因拷贝数的增加、转录产物mRNA的增加 ---- 核酸分子生物学方法进行检测 核酸变性、复性基本性质 常用方法 (1)核酸分子杂交（nucleic acid molecular hybridisation）技术 最常用的基本技术 基本原理： ---标记的已知碱基序列 （DNA或RNA单链片段） （探针probe ） （同位素　P32 I125 　 非同位素 生物素 地高辛 荧光素） ---检测靶核酸（待测核酸）中是否存在与之 同源的序列 1.原位杂交 （ISH） 2.荧光原位杂交 （FISH）， 3.双色（多色）银染原位杂交（DSISH） 3.Southern blot (DNA 杂交) 4.Northern blot (RNA 杂交) （2）聚合酶链反应（polymerase chain reaction , PCR）技术 又称体外基因扩增 利用DNA变性和复性原理 体外进行