培训课件：酶联免疫吸附试验(ELISA)操作注意事项.pptVIP

7 比色 ELISA的比色测定由酶标仪进行。此处强调以下几点： （1）酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，室温宜在15－30℃，使用前先预热仪器15－30分钟，测读结果更稳定。各种酶标仪性能不同，使用前应详细阅读说明书。 （2）比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体，然后将板正确放入比色架中，以免锈蚀酶标仪比色架。 （3）比色测定时，一定要注意酶标仪的波长是否已调至合适或所用滤光片是否正确。 （4）单波长或双波长比色选择的问题。 所谓的单波长比色即是通常的以对显色具有最大吸收的波长如450nm或492nm进行比色测定； 而双波长比色则在敏感波长如450nm和非敏感波长如630nm下各测定一次，最后酶标仪给出的数值为敏感波长下的吸光度值与非敏感波长下的吸光度值的差值。 因此，双波长比色测定具有能排除由微孔板本身、板孔内标本的非特异性吸收、指纹、刮痕、灰尘等对特异显色干扰的优点。 8 结果判断 ELISA测定按其表示测定结果的方式分为定性和定量测定两大类。 定性测定只是对样品中是否含有待测抗原或抗体作出“有”或“无”的结论，分别用“阳性”和“阴性”来表示；定量测定，每批测试均须用一系列不同浓度的标准品在相同的条件下制作标准曲线。 产生非特异性显色的原因 试剂盒因素：固相载体原料的不同和制作工艺的差别、包被物的提纯度、固相载体表面未被包被的空隙封闭不良等； 人为因素：