京尼平交联磁性壳聚糖微球的制备及其脂肪酶的固定化-应用化学.PDF

第３０卷 第８期 应 用 化 学 Ｖｏｌ．３０Ｉｓｓ．８ ２０１３年８月 　　　　　　　ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＰＰＬＩＥＤＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　　　　　　　 Ａｕｇ．２０１３ 京尼平交联磁性壳聚糖微球的制备及其脂肪酶的固定化 唐荣华　段　玮　陈　波 （湖南师范大学化学生物学中药分析省部共建教育部重点实验室　长沙４１００８１） 摘　要　采用反相悬浮法与溶胶凝胶法结合制备磁性壳聚糖微球，并以此为载体，京尼平为交联剂，脂肪酶为 模型酶进行固定化，研究了酶固定化的最优条件和固定化酶的性质。结果表明，在京尼平浓度为０６ｇ／Ｌ、交 联温度为５５℃、交联时间８ｈ，固定化酶的比活力最大，为４．３１Ｕ／ｇ。固定化酶在２５～３５℃，ｐＨ值在８．０有 最大活性，其米氏常数Ｋ为０２６ｍｏｌ／Ｌ。同时，固定化酶具有良好的热稳定性及ｐＨ稳定性，可重复利用，且 ｍ 能进行磁分离。 关键词　磁性壳聚糖微球，京尼平，固定化酶 中图分类号：Ｏ６２９．８　　　　　文献标识码：Ａ　　　　　文章编号：１００００５１８（２０１３）０８０９２２０５ ＤＯＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１０９５．２０１３．２０４８５ ［１］ 京尼平（Ｇｅｎｉｐｉｎ）是栀子苷经 葡萄糖苷酶水解后的产物，是一种天然生物交联剂 。京尼平属于 β ［２］ ［３］ 环烯醚萜类化合物 ，具有羟基、羧基等多个活性官能基团 ，可以单分子和多分子形式与明胶、壳聚 ［４］ 糖等进行交联 ，如Ｓｃｈｅｍｅ１所示。 Ｓｃｈｅｍｅ１　Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇｒｅａｃｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｍｅｒｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇａｍｉｎｅｇｒｏｕｐｓｗｉｔｈｇｅｎｉｐｉｎ ［５］ 作为一种新型的交联试剂，京尼平能够形成稳定、有效的交联制品 。而且与传统的化学交联剂相 比，它还具有细胞毒性（基因毒性）低、生物相容性好和抗降解能力强的优点。近年来，京尼平作为交联 ［６７］ ［８］ ［９］ ［１０］ 剂广泛的应用在生物医学等领域 。其中在药物控释材料 、微胶囊 、皮肤组织 和软骨组织工 程［１１１２］等方面已有大量的研究报道，然而京尼平作为交联剂在固定化酶中应用的相关报道较少。 本文采用反相悬浮法与溶胶凝胶法结合，制备了磁性壳聚糖微球，并以此为载体，京尼平为交联剂， 脂肪酶为模型酶进行固定化，研究了酶固定化的最优条件和固定化酶的性质。结果表明，京尼平作为交 联剂所得的固定化酶酶活性高，有良好的热稳定性及ｐＨ稳定性，还具有易分离、可重复利用等优点。京 尼平为交联剂在固定化酶及酶抑制剂筛选方面具有十分重要的应用前景。 １　实验部分 １．１　试剂和仪器 壳聚糖（脱乙酰度８５％～９０％，国药集团化学试剂有限公司）；ＦｅＯ纳米粒子（粒径 １００ｎｍ，杭州 ３ ４ ２０１２１０２４收稿，２０１２１２１１修回 国家“８６３”课题（２０１０ＡＡ０２３００１）、国家自然科学基金２１２７５０４９、湖南省科技计划课题（２０１０ＴＴ１００１）和湖南 省高校科技创新团队支持计划资助 通讯联系人：陈波，教授；Ｔｅｌ：０７３１Ｆａｘ：０７３１Ｅｍａｉｌ：ｄｒｃｈｅｎｐｏ＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ；研究方向：中药及色谱分析 　第８期 唐荣华等：京尼平交联磁性壳聚糖微球的制备及其脂肪酶的固定化 ９２３