固定化双酶系统的仿生构建及应用研究-生物化工专业论文.docxVIP

河北 河北工业大学硕士学位论文 固定 固定化双酶系统的仿生构建及应用研究 摘 要 近些年，作为双歧因子的低聚异麦芽糖受到了人们的广泛关注。我国生产的低聚 异麦芽糖产品大多是功能成分为 50%的初级产品(IMO-500)，严重影响了其功能效价 和商业价值。而把初级产品制成功能成分 90%以上(IMO-900)的低聚异麦芽糖，其经 济效益大幅度提高。工业上急需解决的问题就是提高低聚异麦芽糖的纯度。本文主要 研究仿生制备微囊，实现对葡萄糖氧化酶(GOD)的固定化，并构建了含 GOD 和过氧 化氢酶(CAT)的双酶体系，实现了低聚异麦芽糖的高效纯化，且操作稳定性较强。主 要研究内容总结如下： 第一部分，将层层自组装技术与仿生矿化技术相结合，由聚苯乙烯磺酸钠(PSS)、 聚 二 甲 基 二 烯 丙 基 氯 化 铵 (PDADMAC) 和 仿 生 二 氧 化 硅 成 功 制 备 (PSS/PDADMAC)2-SiO2 微囊。采用扫描电子显微镜、红外光谱和热重对微囊的形貌和 化学结构进行了表征。以该微囊作为理想载体固定化葡萄糖氧化酶。结果表明，固定 于该微囊中的葡萄糖氧化酶的热稳定性、pH 稳定性、操作稳定性得到了提高；在最 适条件下，该微囊固定化葡萄糖氧化酶的酶活回收率为 72.85%，米氏常数是游离葡萄 糖氧化酶的 2.21 倍。 第二部分，将 GOD 与 CAT 共包埋于(PSS/PDADMAC)2-SiO2 微囊，构建共固定 化双酶系统。之后，将该双酶系统用于去除低聚异麦芽糖中的葡萄糖，确定其最适反 应条件为：当温度为 40 ℃，pH=4.0，底物浓度为 300 mg/ml，GOD 酶活为 600 U， GOD:CAT 酶活比为 1：4 时，葡萄糖的去除率可达 75.21%。对该双酶系统的操作稳 定性进行考察，结果表明，在重复使用 6 次之后，葡萄糖的去除率仍可达 68.85%。 第三部分，将层层自组装技术、仿生矿化和仿生粘合相结合，由 PSS、PDADMAC、 仿生二氧化硅和去甲肾上腺素(NE)成功制备(PSS/PDADMAC)2-SiO2-pNE 微囊。采用 扫描电子显微镜和红外光谱对微囊的形貌和化学结构进行了表征。之后，将 GOD 与 CAT 分别固定于该微囊的不同区域，完成分隔式固定化双酶系统的构建。以此分隔式 固定化双酶系统去除低聚异麦芽糖中的葡萄糖，确定了其最适反应条件：当温度为 40 ℃，pH=4.0，底物浓度为 200 mg/ml，GOD 用量为 800 U，GOD：CAT 为 1：5 时， 葡萄糖的去除率可达 80.73%。对该固定化酶的操作稳定性做了探究，结果表明，在重 复使用 6 次之后，葡萄糖的去除率仍可达 70.22%。 关键词：仿生矿化，仿生粘合，双酶系统，低聚异麦芽糖，微囊 I PAGE PAGE IV PAGE PAGE III ABSTRACT In recent years, isomalto-oligosaccharide (IMO) as the bifidus factor has attracted great public attention. In China, most IMO products are the primary ones which have only 50% of the functional IMO (IMO-500) and this decreases the functionality and commercial value of the products. However, the economic benefits will be greatly improved if the content of the functional IMO increases to more than 90% in the product (IMO-900). Therefore, the increase in the purity of IMO is the key problem to be solved. This paper discusses biomimetic method for the preparation of microcapsules for glucose oxidase (GOD) encapsulation. Besides, two enzymes, GOD and catalase (CAT), are immobilized on these microcapsules, resulting in bienzyme systems. When utilized for the purification of IMO, t