产腈水合酶菌株的驯化选育及其产酶条件的优化-食品与发酵工业.PDF

研究报告 产腈水合酶菌株的驯化选育及其产酶条件的优化 ! ! ! ! ! 邓 林 刘延岭 王忠彦 胡 承 孙 勇 段洪武 （四川大学生命科学院，成都， ） （四川省食品发酵工业研究设计院，成都， ） ! #!$$#% #!!!$ 摘 要 以 为出发菌株，通过逐渐增加培养基中丙烯腈的浓度重复继代培养，得到 株酶 !#$#%#%%’ ’( ) *+, ! ! 活为-. ) / 01 23 的腈水合酶高活力菌株*+, ，酶活比出发菌株*+, ! 提高了/- 4 。对菌株*+, 的产酶条件进 行了优化。结果表明，葡萄糖、诱导剂脲、 7 及 是影响腈水合酶高效表达的主要因素。在葡萄糖浓度为 56 (8 $ ，诱导剂脲的添加量为 ，钴离子加入量为 ；培养温度为 ，培养基初始 为 的条件 31 + $ ) $# 31 + $ ) 31 + $ 9 (8 - ) $ 下培养%$ : 后，酶活可达 !% ) ; 01 23 ，比优化前提高了#. 4 。 关键词 腈水合酶，红球菌，驯化选育，产酶条件 腈水合酶（ ， ）是以 浓度，对菌株进行驯化选育。 =?@AB :CD@E?E’B F5% ) ) ! ) /% 硫原子和半胱氨酸 亚磺酸残基（ ）为绝对中心 营养因子实验：以添加诱导剂的发酵基础培养基 , 5C’!! ［］ ［］ ! 的一类可催化腈水解的酶 。G’EH6 等 最先发现 为基础（每 ;$ 2 + 三角瓶中培养基体积皆为 ; 这一物质具有降解有毒物质乙腈的效果，并命名为 2 + ），根据不同实验要求进行配制。在葡萄糖梯度实 “腈水合酶”。随着科研人员对腈水合酶的生物合成 验中，每瓶培养基分别含有下列浓度的葡萄糖（1 3 ［］ ［］ 调节 % 、结构与催化机理 及其酶学特性的深入研 ）：、 、 、 、 、 ；在发酵基础培养基中，首先 + ; !$ !; $ ; $ 究，腈水合酶已被成功的应用于工业生产丙烯酰胺。 7 7 7 7 考察 、 、 、 等金属离子对腈水合酶 56