海岛棉资源材料枯萎病抗性分析及抗枯萎病性相关基因的筛选-作物遗传育种专业论文.docxVIP

11111111111111111111111111111111111111111111111111 Y3101492 本文是国家科技支撑计划项目课题 海岛棉高密度遗传连锁图谱构建及抗病标记辅助选择效 应评价的部分研究成果 〈项目编号: 课题主持人:曲延英教授 〈新疆农业大学〉 11 万方数据 海岛棉资源材料枯萎病抗性分析及抗枯萎病性相关基因的筛选 摘要 本研究在 2014 年和 2015 年对 80 份海岛棉资源材料进行了枯萎病抗性调查，并对病指数据和产 量数据进行两年的双因素方差分析和相关性分析。同时，在室内进行了以 06-146 为父本、新海 14 为母本的 RIL 系后代中挑选出的高抗、中抗、感病、易感的 10893、10895、10897、10796 和父母本 共 6 份材料的枯萎病菌诱导试验，在接菌 40 小时后，取下胚轴提取刚A 。通过查阅文献和转录组 测序，获得与棉花枯萎病抗性相关基因或 EST 序列，设计引物，利用提取到的 RNA 进行 q-PCR 技 术，对海岛棉的抗、感材料进行基因表达特性分析。得出的结论如下: I.通过两年的田间调查，根据相关公式，计算出病指、病级、发病率、产量等相关数据。结果 如下:对病指与年份之间进行双因素分析，发现病指在年份之间差异极显著，病指在品种间差异显 著:对所有的材料进行聚类分析， 80 份种质资源材料可以划分为 3 类:通过平均单株产量与年份之 间的方差分析，可以得出产量在年份之间差异不显著，但是不同资源材料与产量之间差异显著:病 指与产量间的相关性分析表明，产量与病指之间呈显著性负相关。 2. 利用转录组测序数据进行分析，结果表明:在感染枯萎病菌样本中抗病响应蛋白基因 PRl和 PR3、毒素分解代谢过程相关基因GSTF和GSTU、防御机制相关基因MRP 、NPR基因、棉酷生物合成 相关基因ACLA 及抗病性R基因Z4Rl和RPS2等己知抗病相关基因在抗病材料中都显著表达，且大部分 基因在抗病样本中的表达水平要显著高于感病样本。差异表达基因功能聚类结果表明，在感染枯萎 病菌样本中都富集到了糖基转移酶、类黄嗣生物合成相关基因。这些代谢路径中的基因成员与海岛 棉抗病性相关，可作为研究海岛棉抗病性的候选基因。 3.利用己报道的与棉花枯萎病抗性有关的基因或 EST序列和转录组测序富集到的基因序列在抗、 感病材料上做荧光定量，通过在抗、感病材料上基因表达差异分析，结果如下: CFW3、CFWI0、 comp628 1O、 comp71372 等抗病相关标记基因，在枯萎病病菌侵染的过程中，感、抗材料之间表达有 明显差异，其差异主要体现在:相对于感病材料，抗病材料的最大表达量出现的时间比感病材料早: 表达量远高于感病材料的:推测这 4个基因可能与海岛棉枯萎病抗性有关。 关键词:海岛棉:枯萎病:实时荧光定量 PCR; 基因表达特性分析 III万方数据 I I I Evaluation of Germplasm Resources of Gossypium barbadense L. and Screening of Genes Related to Resistance to Fusarium wilt Abstract In this s阳dy，a su凹ey on the Fusarium wilt resistance of 80 co饥on gennplasm materials w出 carried out in two years (2014 and 2015). Then，the two 臼ctors variance analysis and correlation analysis of the disease index data and output data were carried out for two ye缸s. At the 臼me time，by referring to the literature and the transcription group sequencing，the resistance related genes or EST sequences were obtained. The induction of Fusarium wilt was tested by 06-146，XH 14，10893，10895，10897，10796，after 40 hours of inoculation ，the extraction of RNA from the embryonic axes w出 extracted. Using the extracted RNA to carry on