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肺癌中S0X2表达临床意义和和预后相关性 【摘要】目的：探讨非小细胞肺癌中S0X2的表达 及其临床意义。方法：应用免疫印迹和免疫组织化学方法， 检测非小细胞肺癌中S0X2的表达情况，并分析其临床病理 特征及与非小细胞肺癌发生发展的关系和预后相关性。结 果：免疫印迹和免疫组化结果均显示S0X2在非小细胞肺癌 中的表达含量远大于正常切缘肺组织。且随着TNM分期增加, S0X2表达含量也逐渐增加。且其S0X2的表达与患者淋巴结 转移正相关，与患者生存期负相关。结论：S0X2可能是非小 细胞肺癌多阶段演进过程中的重要变化分子之一，很有潜力 作为非小细胞肺癌诊断和预后判断的生物标志。 【关键词】非小细胞肺癌；S0X2；生物标志；预后 SOX (SRY-like HMG box)是一类具有一特征性 HMO (high mobility group) DNA结合区域的转录因子家族，在真核生 物中高度保守：l］oSOX2是SOX基因家族组中一个主要成员， 表达于胚胎干细胞，在胚胎的各个发育过程中起重要作用 ［2］。近年来，S0X2被发现在多种肿瘤中高表达，如肺癌、 胰腺癌、乳腺癌和神经内分泌癌等［3］。文献［4］报道在肺癌 中S0X2高表达，但其具体的表达规律以及与患者预后生存 期的相关性未见详细的报道分析，现报告如下。 1材料与方法 1. 1材料 收集2006-2007年于本院接受手术治疗的非 小细胞肺癌患者手术标本84例(随访患者至术后5年)，肿 瘤和癌旁组织放置-80 °C冰箱中保存，所有组织实验前均经 病理学检查证实。其中男50例，女34例，年龄50?75岁， 平均(62. 4±5. 5)岁。根据肺癌国际TNM分期，I期13例, II期27例，III期32例，IV期12例。按病理分期，高分化 26例，中分化35例，低分化23例；按组织学分类：肺腺癌 10例，肺鳞癌62例，肺大细胞癌12例；淋巴结转移54例, 未见转移30例。 1. 2方法 1. 2. 1 Western blot检测S0X2的表达 选取I?IV期肺 癌及癌旁组织各8对，共32例。将组织加入蛋白裂解液， 充分裂解，12 000 rpm离心5 min,取上清，置于-80 °(2低 温冰箱保存。12%SDS聚丙烯酰胺凝胶上电泳。电泳完 毕后使用电转仪将样品转印至PVDF膜。5%脱脂牛奶室温封 闭1 h； 一抗SOX 24 *孵育过夜；二抗室温孵育1 h, ECL 显色后暗室曝光，胶片扫描，图像处理分析。 1.2.2 IHC检测S0X2的表达 选择具有完整临床资料的 非小细胞肺癌组织84例，固定脱水后石蜡包埋切去4 mm厚 组织制作切片。采用Dako Envision TM两步法进行S0X2免 疫组化染色。SOX2抗体购自上海沪尚生物技术有限公司。组 织切片脱蜡、水化及修复抗原。3%H202阻断内源性过氧化物 酶活性后，抗人S0X2抗体4 °C孵育过夜。辣根过氧化物酶 (HRP)标记的Envisionl TM孵育60 min, DAB显色，苏木 素复染、封片，IHC评分。 1.2.3 IHC结果判定S0X2蛋白以细胞膜和胞浆中出现 棕黄色颗粒为阳性细胞。根据全部组织中肿瘤细胞染色的阳 性细胞所占总细胞的比例进行评分。在低倍视野下，阳性细 胞所占比例小于10%为0分，阳性细胞数所占比例为10%? 25%为1分；25%?50%为2分，50%?75%为3分，大于75% 为4分。再根据免疫染色强度进行第二次评分，弱阳性为1 分，中度阳性为2分，强阳性为3分。最后将2次得到的评 分相乘即为最终所得到的免疫组化评分，满分为12分。其 中评分26分作为高表达，0. 05),见表1。 2. 3 Kaplan-Meier生存分析Kaplan-Meier生存分析法 分析了患者总体生存率和S0X2表达与肺癌患者的生存时间 的相关性，S0X2高表达的肺癌患者生存期显著缩短 (P=0. 0161),表明S0X2的表达增高，预示着肺癌患者生存 时间越短，预后相对较差；相反，S0X2表达较低的患者中， 其生存时间则较长，见图2。 3讨论 早期诊断和治疗能够明显提高恶性肿瘤患者的治愈率， 降低死亡率，延长患者生存时间。因此，近年来的研究热点 之一是寻找恶性肿瘤早期诊断的生物标志物，以便早期发现 肿瘤、彻底治愈［5］。肺癌严重威胁着人类的生命安全。建 立有效的诊断、治疗方法对改善肺癌的预后是重要的。 S0X2是SOX家族的一员，它与SOX1同属于SOX家族的B1亚 组。S0X2在早期胚胎发生、神经分化和晶体发育等多种重要 的发育事件中起重要作用［6］。目前与0ct4、c-Myc、Klf4、 Nanog等转录因子一起被认为是胚胎干细胞和生殖细胞的标 志物［7］。肿瘤细胞与胚胎干细胞之间存在着很多相似之处, 尤