多聚嘧啶序列结合蛋白PTB-生物通.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（２）：２４～２８ 多聚嘧啶序列结合蛋白（ＰＴＢ）与ＨＢＶ转录后调节 元件（ＨＰＲＥ）结合抑制ＨＢＶ表面抗原的基因表达 程丽英　张小花　李　毅　蔡雪飞　胡　源　黄爱龙　汤　华 （重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室　重庆　４０００１６） 摘要　采用ＲＴＰＣＲ验证 ＰＴＢ与 ＨＰＲＥ在体外的特异性结合。用 ＨｅｐＧ２．２．１５细胞系、ＨＢｓ ＨＰＲＥ瞬时转染Ｈｅｌａ细胞探讨ＰＴＢ对ＨＢＶ基因表达的影响。结果显示ＰＴＢ能与ＨＰＲＥ特异性 地结合。功能性研究证明ＰＴＢ可以抑制 ＨｅｐＧ２．２．１５细胞的ＨＢｓＡｇ表达量，并呈浓度依赖性。 由ＨＰＲＥ引起的ＨＢｓＡｇ表达的增加也能被ＰＴＢ所抑制。实验数据证明ＰＴＢ通过与ＨＰＲＥ相互作 用抑制ＨＢｓＡｇ的基因表达。 关键词　乙型肝炎病毒　ＨＢＶ转录后调节元件（ＨＰＲＥ）　多聚嘧啶序列结合蛋白（ＰＴＢ）　ＨＢＶ 表面抗原　基因表达 中图分类号　Ｒ３７３ 　　为了更有效地控制自身基因表达和复制，很多病 于含有这些被调节的外显子的ＲＮＡ短的嘧啶富集区。 毒都包含多个基因和顺式调节元件。在 ＨＢＶ基因组 ［１１］ 　　Ｚａｎｇ等 的凝胶迁移实验和紫外交联实验证明 顺式调节元件的研究中，一个基因序列被鉴定为转录 了ＰＴＢ与ＨＰＲＥ的片段ＩＩＩ特异性结合，他们还在片段 ［１］ 后调节元件（ＰＲＥ） 。它分别位于 ｐｒｅＳ／Ｓ基因组 ＩＩＩ中检测到ＰＴＢ的两个结合位点。并证明过表达的 ＲＮＡｓ的非翻译区、逆转录多聚酶和Ｘ蛋白ｐｇＲＮＡ和 ＰＴＢ能促进ＨＰＲＥ上调报告基因ＣＡＴ的表达活性。 ［２］ Ｘ蛋白ｍＲＮＡ的开放阅读框中 。ＨＰＲＥ能够在转录 　　在本文中，我们通过 ＲＴＰＣＲ方法验证 ＰＴＢ与 ［１］ 后水平增加 ＨＢＶ的基因表达 。蛋白质和 ＨＰＲＥ的 ＨＰＲＥ的特异性结合，实验结果显示 ＰＴＢ能够抑制病 结合对ＨＰＲＥ功能的发挥产生重要的作用。与 ＨＰＲＥ 毒表面抗原的表达，从而为深入研究 ＨＢＶ基因表达的 特异性结合的两个细胞蛋白质分子已被鉴定，其中一 调控机制创造条件，为抗ＨＢＶ感染提供新的思路。 个就是多聚嘧啶序列结合蛋白（ｐｏｌｙｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｔｒａｃｔ ［３］ １　材料和方法 ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＰＴＢ） 。 　　ＰＴＢ也被称为 ｐ５７，属于ｈｎＲＮＰ家族。ＰＴＢ最初 １．１　质粒及试剂 ［４］ 是以剪接因子的身份而被鉴定的 。它是一种广泛表 　　表达人类ＰＴＢ的真核质粒表达载体ＰＣＭＶＳＰＯＲＴ６ 达于大多数组织的ＲＮＡ结合蛋白。它结合于 Ｃ或 Ｕ ［５］ ＰＴＢ购买ＡＴＣＣ（ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）公司。 富集的短 ＲＮＡ序列，例如：ＵＵＣＵ或 ＵＣＵＣＵ 。ＰＴＢ ＰＴＢ的ｃＤＮＡ被ＸｈｏＩ和ＳａｌＩ限制性内切酶从质粒 已经被证实通过抑制外显子的融合而在可变性剪接的 ＰＣＭＶＳＰＯＲＴ６ＰＴＢ切下后连接到ｐＥＴ３２ａ（＋）中从而构 负性调控中发挥重要的作用。很多哺乳细胞可选择性 ［６