二甲双胍通过激活自噬促进MC3T3-E1细胞系成骨分化的研究.PDFVIP

现代药物与临床 Drugs Clinic 第 34 卷 第 3 期 2019 年 3 月 ·583 · 二甲双胍通过激活自噬促进 MC3T3-E1 细胞系成骨分化的研究 徐 庆，陈 旭，张彦超，何敬腾，李建军* 中国医科大学附属盛京医院 创伤骨科，辽宁 沈阳 110004 摘 要：目的 探讨二甲双胍通过激活自噬促进 MC3T3-E1 细胞系成骨分化的作用。方法 用含有不同浓度二甲双胍的成 骨诱导剂处理 MC3T3-E1 细胞，其中二甲双胍的浓度分别为 0 （对照）、200 、400 、800 μmol/L 。利用碱性磷酸酶（ALP ）染 色检测二甲双胍促进 MC3T3-E1 细胞成骨的最适浓度，采用免疫印迹法（Western blotting ）和免疫荧光法检测自噬相关蛋白， 并选择出二甲双胍的最佳干预浓度。对照组、二甲双胍 400 μmol/L 组、二甲双胍 400 μmol/L ＋3- 甲基腺嘌呤（3-MA，5 mmol/L ） 组和 3-MA 5 mmol/L 组分别干预 MC3T3-E1 细胞 4 h 后，采用 Western blotting 法、免疫荧光法、透射电镜检测自噬指标， 并利用 ALP 染色、半定量 RT-PCR 和 Western blotting 检测成骨能力。结果 二甲双胍能够剂量相关性地促进 MC3T3-E1 细 胞的 ALP 活性，并且 400 μmol/L 二甲双胍是促进 MC3T3-E1 细胞成骨的最适浓度。二甲双胍 0 （对照）、200 、400 μmol/L 组的 LC3 II/I 比值逐渐增大，P62/β-actin 比值逐渐减小，LC3 荧光强度逐渐增强；800 μmol/L 二甲双胍组的 LC3 II/I 值减小， P62/β-actin 比例增大，LC3 荧光强度下降；且与对照组比较，400 μmol/L 二甲双胍组的 LC3 II/I 比值明显增大，P62/β-actin 比值明显降低（P ＜0.05 ），LC3 荧光强度最强。与对照组比较，二甲双胍 400 μmol/L 组中 LC3 II/I 的比值增大，P62 蛋白表 达减少（P ＜0.05 ），LC3 荧光强度增强，自噬体数量增多；ALP 活性增强，成骨相关基因和蛋白 OCN，COL1 的表达增强 （P ＜0.001、0.05、0.01 ）。二甲双胍中加入3-MA 5 mmol/L 后，LC3 II/I 的比值减小，P62 蛋白表达增多，LC3 荧光强度减弱， 自噬体数量减少；ALP 活性减弱，成骨相关基因和蛋白 OCN，COL1 的表达减弱。结论 二甲双胍能通过激活 MC3T3-E1 细胞系的适度自噬促进其成骨分化。 关键词：二甲双胍；自噬；MC3T3-E1 细胞；成骨分化 中图分类号：R966 文献标志码：A 文章编号：1674 - 5515(2019)03 - 0583 - 08 DOI: 10.7501/j.issn.1674-5515.2019.03.002 Research on metformin promotes osteoblastic differentiation of MC3T3-E1 cells by activating autophagy XU Qing, CHEN Xu, ZHANG Yan-chao, HE Jing-teng, LI Jian-jun Department of Trauma Orthopaedics, Shengjing Hospital of China Medical University, Shenyang 110004, China Abstract: Objective To investigate the effects of metformin promoting osteoblastic differentiation of MC3T3-E1 cells by activating autophagy. Methods MC3T3-E1 cells were treated with osteogenic inducers containing different concentrations of metformin, and the concentrations of metformin