固氮施氏假单胞菌RNA分子伴侣蛋白Hfq的功能鉴定及表达特性研究-植物病理学专业论文.docxVIP

分类号华中农业大学硕士学位论文 分类号 华中农业大学硕士学位论文 固氮施氏假单胞菌RNA分子伴侣蛋白Hfq的功能鉴定 及表达特性研究 Functional characterization and regulation of the RNA Chaperone Hfq in the Nitrogen—fixing Pseudomonas stutzeri A1501 研究生：王巍 学 号：2012301110159 指导教师：林敏研究员 侯明生教授 燕永亮副研究员 战嵛华助理研究员 专业：植物病理学 研究方向：固氮微生物与基因工程 获得学位名称：农学硕士 获得学位时间：2015年6月 华中农业大学植物科学与技术学院 二。一五年六月 万方数据 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权掣瓣学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权掣瓣 学位论文 楚番镙密 磊 如需保密，解密时间 年 月 厨 独创性声瞬 本人声曦所星突辩论文是我个人在导簿糖导下送彳亍蛹研究王俸及酝褥昀研究成 爰。尽我所知。除了交中特男《加以标注和致谢豹魂方外。论文申不包含其继人已经发 袭或撰写逐麓研究成暴，也不包含为羲墨挚孛农丝犬学或冀匏教富祝椽盼学位或证书 簿便用过鲸材糕，摇等畿搿蔚此进行了事定。与我一阎j佟酶圈志对本研究所敝的任 何夷觳均已在论文中鬣了翳硗旃谠镄，蒡表示了谢意。 磺究生篓名： 互筑 爵簿：矽膳年 F月 ：否g 学位论文使用授权书 旗人完全了孵华中农业大学装予镖存、使筠学佼论穷终规定，帮学垒必须按照掌 莰器黎提交掌位论宠抟露i烈誊和毫予版本；掌嫒鬻衩保存挺蹙论文自勺印蹴叛釉电予版， 萍搓缀菅最掺索和凝劳凝努，可以暴j霉影窜、缚窜蕺扫籀等复糕手段缘存、汇缡学位 论文。本人慝意华孛农曼大学霹‘毅餍不恩方式在不弱操体至笺袭、传播学位沦麦的金 毫§残帮分态客，尚存在镶冁合髂荚系戆尼弟离校用户提供囊豢蛰递和突搀黼务，阔时 1；j{：人像留在箕缒瓣体发表论文的稷杰。 注；绦密学位论文(鼯涉及技术戮密、裔业秘密或申请专利等潜囊锵要提交缳密的论 文)穗解密髫适餍予本臻穰书。 学位双终携襄：王巍 副簧强f乏哆蚴- { 签耄露霸： 矽压警s震菇露 签名墨期：一班j≯1／彩基 万方数据 固氮施氏假单胞菌RNA分子伴侣蛋白Hfq的功能鉴定及表达特性研究目录 固氮施氏假单胞菌RNA分子伴侣蛋白Hfq的功能鉴定及表达特性研究 目录 摘要 i Abstract ． ．．． ．．． ．．． ．．．． ．．．．．．． ．．．．．．．．．． ．．．． ．．．．．．．． ．．． ． ．．．．．iii 第一章文献综述 一1 1．1前言 l 1．2 Hfq的发现及其主要特征 1 1．3 Hfq参与生理调控的分子机制 3 1．3．1 Hfq参与靶标基因的转录后调控 一3 1．3．2 Hfq介导sRNA与rpoSmRNA的相互作用 3 1．3．3 Hfq蛋白自身表达活性的调控 ～5 1．4 hfq参与多种生理功能 ．6 1．4．1 hfq参与细菌的生长及胁迫抗性 6 1．4．2 hfq影响细菌的群体感应 7 1．4．3磁r影响细菌致病性 9 1．4．4 hfq影响细菌生物固氮 ．10 1．5立题依据 1l 第二章施氏假单胞菌A1501中hfq突变株和回补菌株的构建 ．12 2．1材料 一12 2．1．1菌株和质粒 12 2．1．2培养基 12 2．1．3酶和化学试剂 13 2．14主要仪器 14 2．2方法 ¨¨ ．14 2．2．1细菌质粒的提取 ，．i4 2．2．2细菌基因组的提取 15 2．2．3引物设计 ．．．． 一16 2．2，4 PCR产物的纯化 16 2-2．5酶切及连接 ．．．． ．．17 2．2．6连接产物的转化 一17 万方数据 华中农业大学2015届硕士研究生学位(毕业)论文2．2．7三亲本结合实验 华中农业大学2015届硕士研究生学位(毕业)论文 2．2．7三亲本结合实验 17 2．2．8 hfq转录分析 ．．1 8 2．3结果分析 ．19 2．3．I hfq在染色体上的分布 一19 2．3．3 hfq非极性突变株的构建 一2l 第三章物突变株生理生化表型的鉴定 26 3．1材料 一26 3．1．1菌株和质粒 26 3．1．2培养基 26 3．1．3酶和化学试剂 27 3．1．4主要仪器 27 3。1．5 PCR引物设计 28 3．2方法 一30 3．2．1生长曲线的测定 30 3．2．2固氮酶活的测定 3 1 3．2．3 Western blot检测固氮调控蛋白表达水平 3 1 3．2．4逆境胁迫实验 33 3．2．5反硝化能力的测定 33 3．2．6趋化运动实验 34 3．2．7生物膜的测定 34 3．2．8 Biolog分析野生