甲基化受体蛋白MCP2923在睾丸酮丛毛单胞菌CNB-微生物学报.PDF

微生物学报 A cta Microbiologica Sinica 2017, 57(11): 1676-1687 /actamicrocn DOI: 10.13343/ki.wsxb Epigenetic Modification 表观遗传修饰 甲基化受体蛋白MCP2923 在睾丸酮丛毛单胞菌 CNB-1 趋化过 程中的作用 1,2 1,2 1,2,3 1,2,3* 何蕴喆 ，黄舟 ，姜成英 ，刘双江 1 中国科学院微生物研究所，北京 100101 2 中国科学院大学，北京 100049 3 IMCAS-RCEECAS 环境微生物技术联合实验室，北京 100101 摘要：【目的】MCP2923 是睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni) CNB-1 的一种甲基化趋化受体蛋 白，本研究旨在阐明其在 CNB-1 菌株趋化过程中的作用。【方法】利用游动平板法(swimming plate)检测 了 CNB-1 及 其 MCP 突 变 菌 株 CNB-1∆20 、CNB-1∆MCP2923 、CNB-1∆20/pDSK519-MCP2923 、 CNB-1∆20/pBBR1MCS-2-MCP2923 和 CNB-1∆20/pBBR1MCS-2-MCP2923∆LBD 对 35 种芳香族化合物以 及 9 种小分子有机酸的趋化性；进一步利用 Agarose-in-plug 法表征了 MCP2923 介导的对芳香族化合物 的趋化表型；结合生物信息学分析，对 MCP2923 配体结合结构域(MCP2923LBD)进行了克隆、表达和 纯化，利用等温滴定量热法(ITC)检测了 MCP2923LBD 与原儿茶酸等 11 种化合物的相互作用。【结果】 CNB-1 对原儿茶酸、4-羟基苯甲酸等 12 种芳香族化合物以及顺乌头酸等 9 种 TCA 循环中间代谢产物具 有强、中强和弱 3 个层次的趋化表型；敲除 MCP2923 基因减弱了菌株对上述趋化诱导物的表型；将 MCP2923 基因回补到 CNB-1∆20 菌株中可回补菌株对 15 种趋化效应物的表型，敲除 MCP2923 基因的 配体结合区丧失了对 15 种趋化物的表型回补能力。虽然 Agarose-in-plug 法检测到了菌株对原儿茶酸和 4-羟基苯甲酸的趋化表型，但 ITC 未能检测到原儿茶酸和 4-羟基苯甲酸等 11 种化合物与 MCP2923LBD 直接的相互作用。【结论】MCP2923 可引发 CNB-1 菌株对多种芳香族化合物以及小分子有机酸的趋化 表型，且 MCP2923LBD 在这个过程中起关键作用；由于 ITC 的结果不能证明 MCP2923LBD 与芳香化 合物和小分子有机酸等效应物的直接结合，推测 MCP2923 引发 CNB-1 趋化作用的机制不同于已报道的 MCP2201 和 MCP2901 的作用方式，其确切机制还有待于进一步深入研究。 关键词：睾丸酮丛毛单胞菌 CNB-1 ，甲基化受体蛋白(MCP) ，细菌趋化性，芳香化合物，三羧酸循环(TCA) 基金项目：国家自然科学基金 *通信作者。Tel ：+86-10；Fax ：+86-10；E-mail ：liusj@ 收稿日期：2017-02-07 ；修回日期：2017-04-04 ；网络出版日期：2017-05-16 何蕴喆等 | 微生物学报, 2017, 57(11) 1677 细菌的趋化性是细菌趋向对自身有利或者躲 种，代谢依赖型的趋化包括：(1) 通过 Aer 类受 避对自身有害的环境因子或者化学物质，从而使 体感应 FAD 的氧化还原状态来介导微生物对芳香 细菌处于最适生长环境中的一种行为。因为具有 化合物的趋化性；(2) 通过感应代谢中间产物来 最简单的趋化信号通路，E. coli 作为细菌趋化性 介导微生物的趋化性。代谢依赖型趋化过程中 研究的模式生物[1] ，其包括 5 个甲基化受体趋化蛋 MC