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量子点为载体转染survivinsiRNA至人舌鳞癌Tca8113细胞探究 ［摘要］目的 靶向survivin基因的siRNA通过量子 点为载体转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中，研究其对 survivin基因表达的影响，为量子点在肿瘤的基因治疗方 面提供实验依据。方法Survivin siRNA通过量子点转染至 人舌鳞癌Tca8113细胞中，同时设立LIPOFECTTAMINE 2000 脂质体为转染载体的对照组以及未转染的空白组，采用实时 定量RT-PCR检测各组Tca8113细胞中survivin mRNA表达 的改变情况。结果 实验组用50 pmolQD转染100 pmol survivin siRNA 入 Tca8113 细胞 48 h 后，检测到 survivin siRNA mRNA表达量相对于空白组下降64%, QD与siRNA的使 用比例为 1 ： 2；对照组中用 100 pmol lipofectamine2000 脂质体转染 100 pmol survivin siRNA 入 Tca8113 细胞 48h 后，检测到survivin siRNA mRNA表达量相对于空白组下降 90%, QD与siRNA的使用比例为1 ： 1。结论量子点为载体 转染survivin siRNA能够有效的抑制Tca8113细胞survivin mRNA的表达，量子点有望作为RNA干扰技术的新型载体。 ［关键词］量子点；舌鳞癌Tca8113细胞;siRNA ［中图分类号］R19 ［文献标识码］A ［文章编号］ 1674-0742 (2013) 08 (b) -0001-04 人类肿瘤的发生、发展大多是由于基因的改变致细胞凋 亡的异常引起的。人体常见的口腔肿瘤细胞中，survivin基 因的水平一般都会升高，它会抑制细胞凋亡。细胞凋亡与增 殖一样，是一个高度可调节性的生物化学过程。RNA干扰(RNA interference, RNAi)成为目前的热点研究之一，它是多种 生物体内由双链 RNA (double stranded RNA, dsRNA)分子 介导的基因阻抑现象，通过导入外源或内源的dsRNA,细胞 内加工后产生siRNA (小分子干扰RNA片段)可以特异性阻 滞基因的表达，使内源性mRNA发生特异性降解，从而引起 转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing, PTGS)o 量子点(quantum dot, QD)是一种直径在1?lOOnm的 半导体纳米颗粒，而粒径在2?10nm的量子点可通过内吞作 用进入细胞。QD具有特殊的光学特性，单一种类的QD能按 照尺寸变化产生发光波长不同、颜色分明的荧光，并且这种 荧光的强度和稳定性都大大优于有机荧光染料，可以让研究 人员更长时间地观察细胞或组织；此外，QD具有良好的生物 相容性，对细胞的毒性低。2010年1月一2012年9月在该 研究中，利用量子点作为非病毒的基因转染载体，对口腔鳞 癌Tca8113细胞中高表达的凋亡抑制基因Survivin的siRNA 进行修饰并转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中，达到有效抑制 survivin基因的表达至肿瘤细胞凋亡的目的。以期望对口 腔鳞癌细胞中高表达的凋亡抑制基因Survivin基因沉默提 供理论和实践依据，探索出一种安全，低毒，高效并可进行 动态观测的siRNA转运载体。 1材料 1转染所需设备试剂 人舌鳞癌Tca8113细胞 Survivin siRNA： 20nmol 冻干粉 量子点(QD605)：表面带正电荷的水溶性量子点, 4 mol/L LIPOFECTAMINE 2000 脂质体 OPTI-MEM I 培养基 荧光显微镜：OLYMPUS, 1X51 1.2实时定量RT-PCR所需主要试剂及设备 1.2. 1主要试剂①Trizol RNA提取试剂；②氯仿；③ 异丙醇；④无水乙醇；⑤SYBR Green PCR Master Mix；⑥ 焦碳酸二乙酯(DEPC)； ?TBE电泳缓冲液：Tris碱54 g, 硼酸 27. 5 g, 0. 5 mol/EDTA (PH： 0) 20 mL,加双蒸水 600 mL,剧烈搅拌至溶解，加水至1000 mL定溶，即为5XTBE, 用时加双蒸水稀释成0. 5XTBE；⑧核酸染料。 2. 2主要设备 ①高速冷离心机：Heraeus, Megafuge 1.0R；②定量 PCR 仪：ABI PRISM 7500*Sequence Detection System；③电热恒温鼓风干燥箱：Heraeus, UT6；④Eppendof 管、Tip头等均用0. 1%的DEPC水浸泡过夜，用无菌蒸憎水 冲洗后，高压灭活DEPC活性，371烤箱烘干备用；⑤