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质粒分子生物学与质粒技术 第1讲 质粒分子生物学概论 什么是质粒 质粒的复制分配和不相容性 质粒的接合转移 细菌质粒控制的表型 ①抗性质粒 ②毒力质粒 ③降解质粒 ④共生质粒 1.2 细菌质粒 1.3 真核生物的DNA质粒 环状DNA质粒：酵母2mm质粒，植物线立体中的环状DNA质粒，人和动物的核DNA质粒等，它们都是不知其功能的隐蔽质粒。 线状DNA质粒：乳酸克鲁维酵母的嗜杀线状DNA质粒，植物线粒体中与雄性不育有关的线状DNA质粒。 1.4 真核生物的RNA质粒 有壳体的dsRNA质粒：由蛋白质壳体包裹，存在于某些真菌和植物细胞中，由于它们酷似病毒，所以也常被称作真菌病毒和植物隐蔽病毒，或称类病毒颗粒，典型代表是酿酒酵母的嗜杀dsRNA质粒。与RNA病毒的主要区别是它们不具有感染性． 无壳体的dsRNA质粒：存在于脂质小囊中的栗疫菌减毒dsRNA质粒，玉米线粒体中与雄性不育有关的dsRNA质粒。 2.3 不相容性 (Incompatibility) 两种质粒不能在同—个寄主细胞中共存的现象，叫质粒的不相容性。质粒之间的不相容性，是由于它们存在—种或几种与质粒复制或分配有关的相同因子，如基本复制子中的反向转录区(ColE1质粒的RNAⅠ)，ori区中的重复子(Iteron)，与分配蛋白结合的分配位点。不相容性是质粒分类的理想标准。肠道细菌质粒分别属于30多个不相容组，用Inc表示。 3.1 F质粒的接合转移机制 F质粒的分子大小为100 kb，编码接合转移功能的tra基因区位于遗传和物理图谱的66.6－100 kb 位置，编码37个蛋白质和1个反义RNA，这些分子分别负责性菌毛的合成和装配，杂交对的稳定，表面排斥，DNA转移，以及tra区基因表达的调节。 3.2 细菌染色体的诱动 细菌的染色体与质粒的转移原点oriT序列共价连接，染色体作为质粒DNA的延伸部分被转移。可以利用这一功能定位染色体基因，以及获得含有染色体片段的质粒。 3.3 非接合质粒的诱动 许多天然质粒虽然是非接合性的，但仍然含有一个oriT位点和转移基因，当与它共存的接合质粒提供一个接合系统时，也能进行有效的转移，称之为诱动 (Mobilization)。 4 细菌质粒控制的表型 4.1 抗性质粒 包括抗菌素抗性（R）质粒和金属抗性质粒。R质粒的进化、转移和扩散给抗菌素治疗带来很大麻烦，是医学所面临的重大问题之一。R质粒与转座子（Transposon）和整合子（Integron）的相互作用，使细菌耐药性问题更加严重。 4.2 毒力质粒 许多细菌的致病力和毒性与质粒有关，如大肠杆菌肠毒素和定居抗原，破伤风毒素，炭疽毒素，溶血毒素，苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白，植物冠瘿病（Ti质粒）和发根病（Ri质粒）。 4.3 降解质粒 许多环境污染物的降解途径由质粒基因编码，降解基因组成几个操纵子，操纵子的表达受调节基因控制。目前，已经测定全序列并注释基因的降解质粒有10余种，分别是尼龙寡聚体降解质粒pOAD2，芳香烃降解质粒pNL1，除草剂阿特拉津降解质粒pADP-1，甲苯降解质粒pWWO，烟碱降解质粒pAO1，咔唑降解质粒pCAR1, 异丙基苯降解质粒pBD2，卤乙酸降解质粒pUO1，2,4-D降解质粒pJP4，萘降解质粒pND6-1和pDTG1。 The catabolic plasmids that complete sequence has been determined Plasmid Substrates Strain Size (bp) Catabolic References genes pOAD2 Nylon Flavobacterium K172 45519 nylA Microbiology oligomers
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